Capitolo 2 - Omero

‣ Scissione della proteina in peptidi, medianteproteolisi chimiche o enzimatiche: dalla sempliceanalisi sequenziale della porzione N-terminale diuna proteina, non è possibile determinarne lastruttura completa, poiché solitamente le proteinehanno dimensioni maggiori di 60 amminoacidi.Occorre quindi frammentarle in peptidi più piccolie completamente sequenziabili. Questa proceduraprevede la scissione dei legami peptidici in puntispecifici utilizzando sia metodi chimici cheenzimatici.Metodi enzimatici: la scissione proteolitica di unaproteina la si può ottenere incubando la proteinacon un enzima proteolitico in un tampone opportuno.Il tempo, la temperatura della reazione e ilrapporto enzima/proteina possono essere variati aseconda dell'enzima utilizzato e del pattern diframmentazione desiderato. La reazione proteoliticaviene poi bloccata acidificando il tampone direazione o congelando la miscela di reazione oancora aggiungendo degli inibitori delle proteasi.