Capitolo 2 - Omero

Scissione dei legami Asp-X: Questo tipo discissione consiste in una idrolisi acida blandadella proteina. Il materiale proteico vieneripreso in HCl 13 mM, all'interno di una fialache viene chiusa sotto vuoto e messa in stufa a108°C per 2 ore. Questo metodo può essereutilizzato in alternativa alla V8 proteasi,soprattutto per proteine poco solubili.L'efficienza della scissione varia in funzionedell'amminoacido che segue l'Asp. Ad esempio illegame Asp/Pro è senz'altro quello maggiormentesensibile a questo tipo di scissione. Piùstabili a questo tipo di trattamento sembranoessere invece i legami peptidici in cuiintervengono residui idrofobici come Leu o Val.Con questo trattamento si ha lo svantaggio delladeammidazione di residui di Asn e Gln quandoquesti rappresentano l'amminoacido C-terminaledella proteina, inoltre i residui di Trp possonoessere danneggiati. Scissione dei legami Asn-Gly: questi dueamminoacidi quando si trovano vicini, ciclizzanofacilmente formando una succinimide sostituitache risulta particolarmente sensibileall'attacco nucleofilo dell'idrossilamina.