Schede di attività - Epidemiologia eziologica / 2012 - CPO

Epidemiologia eziologicaCentro di Riferimento per l'Epidemiologia e la Prevenzione Oncologica in PiemonteScheda: 4.066Stato di metilazione di HLA-G, infezione da HPV e neoplasie cervicali:studio caso-controllo condotto su una popolazione brasilianaHLA-G promoter methylation status, HPV infection and cervicalneoplasia: a Brazilian case-control studyRESPONSABILE: Prof. Franco MERLETTICOORDINAMENTO:Merletti Franco, Gillio Tos AnnaOBIETTIVI GENERALI E SINTESI PROGETTO:Obiettivo principale: valutazione del ruolo delle modificazioni epigenetiche (de-metilazione delpromotore) e genetiche (polimorfismi) di HLA-G sullo sviluppo di lesioni neoplastiche cervicali.La correlazione diretta tra il tumore della cervice uterina e la persistenza dell’infezione daPapillomavirus umano (HPV) è riconosciuta, ma il meccanismo che favorisce la persistenza viralenelle cellule cervicali è ancora ignoto. Tra le numerose ipotesi, si annovera la maggiore o minorepredisposizione del sistema immunitario nel controllo e nella risoluzione di questo tipo diinfezione. Alcune evidenze scientifiche hanno mostrato il possibile coinvolgimento di una proteinaimplicata nella soppressione della risposta immunitaria, l’HLA-G, e in particolarenell’immunoescape del tumore dal sistema immunitario.Per valutare il ruolo delle modificazioni genetiche ed epigenetiche di HLA-G sullo sviluppo dilesioni neoplastiche cervicali si è allestito uno studio caso-controllo in cui confrontare lo stato diHLA-G in soggetti con cellule cervicali atipiche (lesioni CINII -CINIII) rispetto a soggetti con cellulecitologicamente normali, in relazione con lo stato di infezione da HPV.MATERIALI, METODI E RISULTATI ATTESI:Metodi.Nell’ambito di una collaborazione tra l’Unita’ di Epidemiologia dei Tumori dell’Università di Torinoe il centro LIGH (Lab of Immunogenetics and Histocompatibility), Federal University of Paranà,della città brasiliana di Curitiba, è stato allestito uno studio caso- controllo che coinvolge 789donne (tra i 15 e i 47 anni) afferenti a tre centri di riferimento per le analisi citologichecervico-vaginali della città di Curitiba. La popolazione di questa città, non essendo attiviprogrammi organizzati per lo screening del tumore cervicale, e’ caratterizzata da una prevalenzadi lesioni cervicali di alto grado più elevata rispetto a quella italiana. Questo ha permesso laraccolta di un’ampia serie di campioni da soggetti con lesione cervicale di alto grado in un arcolimitato di tempo. La serie dei controlli comprende 510 soggetti che hanno ricevuto un esitocito/istologico normale. La serie dei casi comprende 279 soggetti con esito istologico di CIN II oCIN III (150 e 129 rispettivamente). Ai soggetti inclusi nello studio è stato proposto un questionarioper raccogliere informazioni anamnestiche riguardanti dati demografici (età, gruppo etnico, livellod’istruzione) ed abitudini di vita (abitudini sessuali, numero di gravidanze, abitudine al fumo).A tutte le donne partecipanti è stato chiesto di donare un campione di cellule cervicali e uncampione di sangue. Il campione cervicale viene utilizzato per le analisi dello stato di infezione daHPV e dello stato di metilazione di HLA-G. Il campione di sangue viene utilizzato per le analisi deipolimorfismi di HLA-G.I campioni cervicali di tutti i soggetti vengono testati per la presenza di HPV-DNA utilizzando iprimer GP5+/GP6+ e i campioni risultati positivi vengono genotipizzati mediante multiplex PCR.Per le indagini sullo stato di metilazione e sui polimorfismi del gene HLA-G viene avviata una fasepilota dello studio che coinvolge un sottogruppo di casi (N=96) e di controlli (N=76). Lo stato dimetilazione del promotore del gene HLA-G viene valutato tramite pirosequenziamento e le variantialleliche del gene vengono determinate tramite una metodica che prevede la combinazione di unareazione di PCR con sonde specifiche per la sequenza analizzata (SSOP, sequence specificoligonuclotide probes-PCR) e della tecnologia Luminex.Le analisi statistiche confronteranno la serie dei casi e dei controlli rispetto alle misure di outcome(modificazioni genetiche ed epigenetiche) e ai fattori confondenti (gruppo etnico, livello64