ANALYSETECHNIEKEN IN HET LABORATORIUM. - Favv

Principe: men start met een hoeveelheid monster (1g, 25g,...). Dit wordt gemengd met een
hoeveelheid steriele verdunningsvloeistof dat de micro-organismen niet beschadigt, waarna het
geheel gehomogeniseerd wordt. Vervolgens maakt men uit dit homogenaat een reeks decimale
verdunningen (1 ml homogenaat + 9 ml verse verdunningsvloeistof, mengen, hiervan 1 ml nemen + 9
ml verse verdunningsvloeistof enz.) zodat elke verdunning slechts een tiende van het aantal
organismen bevat van de vorige verdunning.
Figuur 4.1.1 Verdunningsreeks
Als men ver genoeg verdunt krijgt men tenslotte 1 of 2 verdunningen die een aantal organismen
bevatten dat bij de verdere analyse (uitplaten en tellen) een telbaar resultaat geeft.
2.1.2.3.5 Uitplaten
Doel: de individuele cellen in een hoeveelheid monster verspreiden op een vaste voedingsbodem
zodat zich uit elke cel een afzonderlijke kolonie kan ontwikkelen die van de andere kolonies
gescheiden is. Die afzonderlijke kolonies kunnen ofwel geteld worden of kunnen als uitgangsmateriaal
dienen voor verder onderzoek.
Principe: een hoeveelheid verdunningsmedium (vb. 0,1 ml) wordt uitgespreid over een vaste
voedingsbodem, meestal in een ronde schaal (Petriplaat). Die bodem bestaat uit agar - een
polysaccharide dat niet afgebroken wordt en dus als vaste matrix dient - met daarin voedingsstoffen
en eventueel indicatoren (vb. voor pH-verandering). Tijdens de groei blijven alle cellen afkomstig van
een enkele cel in de buurt van die eerste cel; als de gebruikte verdunning hoog genoeg is zullen de
individuele cellen ver genoeg van elkaar verspreid zijn zodat afzonderlijke, geïsoleerde kolonies
gevormd worden. De groei kan veranderingen in de voedingsbodem tot gevolg hebben (zuurvorming,
neerslagvorming, afbraak van bepaalde componenten,..) die tot uiting kunnen komen door
kleurveranderingen e.d. rondom de kolonie (pH-omslag door de vorming van zuren als
afbraakproducten bij groei, de neerslag van zwart FeS bij afbraak van S-houdende aminozuren tot
H2S in aanwezigheid van Fe-zouten, ontstaan van een heldere zone bij afbraak van bijvoorbeeld
lecithine e.d.). Daardoor ontstaan kolonies met een typisch uitzicht (kleur, uitzicht, glans, zone...) die
kunnen onderscheiden worden van kolonies ontstaan uit andere organismen dan het gezochte.
18