04.05.2013 Views

ANALYSETECHNIEKEN IN HET LABORATORIUM. - Favv

ANALYSETECHNIEKEN IN HET LABORATORIUM. - Favv

ANALYSETECHNIEKEN IN HET LABORATORIUM. - Favv

SHOW MORE
SHOW LESS

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.

2.1.3.8 E. coli O157 :H7<br />

Tot het species E. coli behoren ook stammen die cytotoxines kunnen aanmaken, nl. verotoxine of<br />

verocytoxine (VTEC). Maar niet alle VTEC-producerende stammen zijn voor mens ziekteverwekkend.<br />

Het vaakst voorkomende en meest pathogene serotype is O157:H7 of enterohemorragisch E. coli. De<br />

code O157:H7 verwijst naar specifieke antigenen op de celwand en flagella van de bacterie. Net als<br />

bij de andere E. coli gaat het om een fecale bacterie die vooral wordt overgedragen door<br />

gecontamineerd voedsel, vooral (rund-)vlees, rauwe melk en levensmiddelen die onvoldoende verhit<br />

zijn. Een andere besmettingsbron is water, vooral zwembadwater.<br />

2.1.3.8.1 Analyse<br />

De detectie van E. coli O157:H7 verloopt als volgt :<br />

• afwegen van een hoeveelheid monster, overbrengen in het vloeibare aanrijkingsmedium<br />

Tryptone Soy Broth (TSB) en homogeniseren,<br />

• vooraanrijking door incuberen bij 41,5°C gedurende 7 uur,<br />

• uit de vooraanrijking 1 ml overbrengen in het vloeibaar selectief medium CT-MAC (Cefixime<br />

Telluriet MacConkey) en gedurende 18 uur incuberen bij 37°C,<br />

• hierna kan men ofwel op een hoeveelheid selectief medium CT-MAC een ELISA uitvoeren<br />

(immunologische detectie van O157:H7, VIDAS), waarbij men bij een positief resultaat een<br />

immunoconcentratie uitvoert om een hogere concentratie aan cellen van E. coli O157:H7 te<br />

verkrijgen, ofwel kan men direct vanuit CT-MAC een concentratie met immunomagnetische<br />

beads uitvoeren met hetzelfde doel,<br />

• het concentraat wordt uitgeplaat op CT-SMAC (= CT-MAC met toevoeging van sorbitol) en op<br />

een chromogeen medium, gevolgd door incubatie gedurende 24 uur bij 37°C.<br />

• indien op CT-SMAC of het chromogeen medium kolonies aangetroffen worden met het<br />

typische uitzicht (kleurloos, soms bruinachtig, diameter > 1 mm op CT-SMAC, purper,<br />

diameter > 1 mm op chomogeen medium) dan de bevestiging uitvoeren door afpikken van<br />

enkele typische kolonies, uitplaten op Nutrient Agar, incuberen gedurende 24 uur bij 37°C<br />

gevolgd door het uitvoeren van een aantal biochemische testen (de API-galerij,<br />

agglutinatietest) om te bevestigen dat het gevonden organisme inderdaad E. coli O157:H7 is.<br />

Figuur 4.1.13 Petriplaat CT-SMAC<br />

50

Hooray! Your file is uploaded and ready to be published.

Saved successfully!

Ooh no, something went wrong!