ANALYSETECHNIEKEN IN HET LABORATORIUM. - Favv

2.1.3.6 Salmonella
Salmonella is de belangrijkste oorzaak van voedseltoxi-infecties. Salmonella behoort tot de
Enterobacteriaceae en is afkomstig uit het spijsverteringsstelsel van warmbloedige dieren. De
aanwezigheid kan meestal worden verklaard door een besmetting van fecale oorsprong door
individuen die ziek of drager zijn. Salmonella kan zich gedurende min of meer lange tijd handhaven
buiten het fecale materiaal en kan zo water en levensmiddelen besmetten.
2.1.3.6.1 Analyse
De detectie van Salmonella volgens ISO 6579:2002 verloopt als volgt :
• afwegen van een hoeveelheid monster, overbrengen in gebufferd peptonwater en
homogeniseren,
• niet-selectieve vooraanrijking door incuberen bij 37°C gedurende 18 uur,
• daarna een parallelle selectieve aanrijking in twee verschillende vloeibare media :
o ml vooraangerijkte cultuur overbrengen in Rappaport Vassiliadis bouillon met
soja (RVS) en gedurende 24 uur incuberen bij 41,5°C,
o ml vooraangerijkte cultuur overbrengen in Muller-Kauffmann Tetrathionaat
novobiocine bouillon (MKTTn) en gedurende 24 uur incuberen bij 37°C,
• isolatie vanuit elke selectieve aanrijking (RVS en MKTTn) op twee verschillende agarmedia
(Xylose Lysine Deoxycholaat agar, XLD, en Brilliance Salmonella), door uitstrijken met behulp
van een entnaald, gevolgd door incubatie gedurende 24 uur bij 37°C,
• indien op deze agarmedia kolonies aangetroffen worden met het typische uitzicht van
Salmonella (zwarte kolonies of rode kolonies met een zwart centrum op XLD, paarse kolonies
op Brilliance Salmonella) dan de bevestiging uitvoeren door afpikken van enkele typische
kolonies, uitplaten op Nutrient Agar (NA) en incuberen gedurende 24 uur bij 37°C, gevolgd
door het uitvoeren van een aantal biochemische testen (de API-galerij) om te bevestigen dat
het gevonden organisme inderdaad Salmonella is.
De detectie van Salmonella met PCR volgens AFNOR iQ-Check Salmonella II (BRD 07/06-07/04
verloopt als volgt :
• afwegen van een hoeveelheid monster, overbrengen in gebufferd peptonwater en
homogeniseren,
• niet-selectieve vooraanrijking door incuberen bij 37°C gedurende 21 uur
• selectieve aanrijking op twee media en uitvoering van PCR:
o 0.1 ml vooraangerijkte cultuur overbrengen in Rappaport Vassiliadis broth met soja
(RVS) en gedurende 24 uur incuberen bij 41,5°C,
o 1 ml vooraangerijkte cultuur overbrengen in Muller-Kauffmann broth (MKTTn) en
gedurende 24 uur incuberen bij 37°C
o Extractie van het DNA van 100 µl vooraangerijkte cultuur met 100 µl lysereagens,
42