Especial microbiologia Pt. 1

Protocolos de Microbiologia Clínica
para salmonelas não-tifóides (fermentação
do propilenoglicol e ausência de betagalactosidase),
somente poucos resultados
falsos-positivos são encontrados.
O maior problema deste meio é a incapacidade
de isolamento de Salmonella
enterica sorotipo Typhi, pois estas não
fermentam o propilenoglicol (17). No meio
SMID, as colônias de Salmonella são também
distintas das demais pela formação
de coloração vermelha intensa (devido à
formação de ácido a partir do glicuronato e
ausência de beta-galactosidase), enquanto
outras bactérias acompanhantes aparecem
como colônias azuis, violetas ou incolores.
Este meio possibilita o isolamento e a
identificação presuntiva de todos os sorogrupos
de Salmonella. Já o ágar ABC (ágar
alfa-beta-cromogênico) explora o fato das
salmonelas poderem ser diferenciadas dos
membros da família Enterobacteriaceae
pela presença da enzima alfa-galactosidase,
na ausência da atividade da enzima
beta-galactosidase (10).
Um total de 1.022 cepas de Salmonella
spp. e 300 outros bacilos Gram-negativos
foram inoculados neste meio. Destas,
99,7% das cepas de Salmonella produziram
colônias com uma coloração verde
característica, ao passo que somente uma
cepa de Escherichia coli atípica (0,33%)
também produziu colônias verdes (100%
de sensibilidade e 90,5% de especificidade)
(10). Atualmente, outros meios
cromogênicos para Salmonella já estão
disponíveis comercialmente e quase todos
eles (com exceção dos meios Rambach e
ABC) detectam a atividade de esterase (Figura
8), positiva para todas as salmonelas.
Figura 8. Ágar cromogênico: Aspecto colonial
de Salmonella spp. (utilização do substrato
cromogênico através da enzima esterase)
Porém, estes meios possuem custo elevado
e são específicos somente para Salmonella.
Outros meios em ágar, invariavelmente,
devem ser usados em conjunto para o isolamento
de outros enteropatógenos, onerando
muito o custo final da coprocultura.
Estes meios obtiveram excelente aceitação
em laboratórios de controle de qualidade,
os quais pesquisam somente Salmonella
(em amostras de águas e alimentos).
Quando qualquer meio de cultura
desidrata, o potencial de oxi-redução (eH)
é alterado, as concentrações dos agentes
inibidores são aumentadas e o efeito
mais visível disso é o pouco ou nenhum
crescimento de colônias. Nos laboratórios
clínicos, onde é freqüente a prática de se
confeccionar meios de cultura para uma
ou mais semanas de trabalho, este efeito
pode ser minimizado embalando as placas
em sacolas plásticas ou, preferencialmente,
envoltas por plástico-filme de PVC (o
mesmo utilizado em cozinha). Mesmo
um tempo razoavelmente curto de duas
semanas sob refrigeração é suficiente para
promover efeitos deletérios nos meios em
placa sem proteção, proporcionando resultados
aberrantes nas análises (13).
Isenberg et al. (6) estudaram vários
meios de cultura seletivos (ágares SS, XLD,
Hektoen) na tentativa de avaliar o grau de
supressão da microbiota intestinal normal
em espécimes fecais, permitindo o crescimento
dos reais patógenos significativos.
Salmonella e Shigella, isolados de espécimes
clínicos humanos, foram misturados
com Escherichia, Klebsiella, Enterobacter,
Serratia e Proteus. Foram feitas diferentes
diluições destas misturas e então semeadas
nas placas de ágar. Os resultados
demonstraram um maior grau de inibição
de Shigella utilizando o ágar SS, ao passo
que os ágares XLD e Hektoen permitiram
o isolamento normal desta bactéria (bem
como de Salmonella), suprimindo consideravelmente
a microbiota intestinal normal
acompanhante.
Vários estudos (5, 25, 26) comprovaram
a inibição de Shigella por microrganismos
pertencentes à microbiota intestinal
normal. Os primeiros estudos mostraram
que Klebsiella/Enterobacter inibia o crescimento
de Shigella em culturas mistas,
indicando que uma possível competição
por fontes de carboidratos fermentáveis
seria a causa principal. Outros estudos
comprovaram parcialmente esta teoria,
uma vez que também foram relatadas inibições
do crescimento de Shigella quando
em presença de Klebsiella/Enterobacter,
mesmo em meios aerados e com excesso
de glicose. No entanto, estes estudos também
provaram que a produção de ácidos
acético e fórmico por estas bactérias (e
também por E. coli) fazia com que as
Shigella entrasse em fase logarítmica de
morte, comprovando que a produção de
ácidos voláteis com a concomitante redução
acentuada do meio eram os principais
mecanismos de inibição do crescimento de
Shigella em culturas mistas.
Os caldos de enriquecimento seletivo
são utilizados para diminuir a quantidade
de bactérias da microbiota intestinal normal
no espécime fecal, inibindo de alguma
forma seu metabolismo e propiciando o
desenvolvimento franco dos verdadeiros
enteropatógenos. Estes caldos devem ser
sempre utilizados como uma etapa prévia,
uma vez que a semeadura direta das fezes
em meios sólidos geralmente leva a um
supercrescimento da microbiota normal,
em detrimento às poucas colônias que
podem ser formadas pelos verdadeiros
patógenos (13).
Deve ser observado que cada caldo
possui suas próprias características e seu
uso deve ser criterioso, seguindo todas as
informações dadas pelos fabricantes para
uma melhor performance. No entanto, em
muitos laboratórios clínicos estes caldos
são usados de forma equivocada, muitas
vezes sem o real conhecimento científico
de sua utilidade. Muitos são os caldos para
o pré-enriquecimento seletivo utilizados em
microbiologia: tetrationato segundo Muller-
Kauffmann, Rappaport-Vassiliadis, selenito
segundo Leifson, selenito-cistina e GN
segundo Hajna. No entanto, com exceção
dos dois últimos, estes meios foram adaptados,
incorretamente, da microbiologia
de alimentos para a microbiologia clínica
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NewsLab - edição 86 - 2008