doplnok - Ústredný kontrolný a skúšobný ústav poľnohospodársky

2.6. celuláza, inkubačný roztok 0,5 % v acetátovom pufri o pH 4,8, ktorý sa pripravuje
takto: Pripraví sa acetátový pufer z roztoku A a z roztoku B.
Roztok A: 5,9 ml kyseliny octovej sa doplní vodou na 1000 ml,
Roztok B : 13,6 g octanu sodného sa rozpustí vo vode a vodou sa doplní na 1000 ml.
Potom sa 400 ml roztoku A zmieša so 600 ml roztoku B a pH sa upraví na 4,8.
Acetátový pufer sa zahreje na teplotu 40°C a pridá sa do neho 5 g celulázy.
Inkubačný roztok sa nesmie zahrievať priamo;
2.7. pepsín 1 : 100 podľa ČsL 4, pričom aktivita komerčného preparátu pepsínu musí
byť deklarovaná výrobcom. Skladuje sa za laboratórnych podmienok v tme,
2.8. pepsín, inkubačný roztok 1,5 % v zriedenej kyseline chlorovodíkovej c (HCl) = 0,4
mol/l, ktorý sa pripravuje tak, že sa roztok kyseliny chlorovodíkovej zahreje na
teplotu 40 ° C a pridá sa do neho 15 g pepsínu. Inkubačný roztok sa nesmie
zahrievať priamo.
3. Pracovný postup
Do inkubačnej nádoby sa naváži 0,5 g vzorky siláže s presnosťou na 0,001 g. Do vzorky
sa pridá 50 ml roztoku celulázy v acetátovom pufri o pH 4,8, vopred zahriateho na teplotu
40 °C a vzorka sa počas 24 h inkubuje vo vodnom kúpeli s miešaním pri teplote 40 °C ±1
°C. Ak ide o škrobnaté krmivá, pred inkubáciou sa pridáva amyláza. Ak sa používa
termostat, obsah nádoby sa opatrne premiešava po uplynutí 1,5 h, 5 h a 22 h tak, aby bol
vír od stredu nádoby. Po 24 h sa roztok celulázy odsaje, vzorka sa premyje horúcou vodou
a do inkubačnej nádoby sa pridá 50 ml 1,5 % roztoku pepsínu v zriedenej kyseline
chlorovodíkovej vopred zahriatej na teplotu 40 ° C a inkubuje sa pri rovnakých
podmienkach ďalších 24 h.
Potom sa roztok pepsínu z nádoby odsaje vodnou vývevou, zvyšok sa premyje horúcou
vodou, preleje malým množstvom acetónu a po vyprchaní acetónu sa nádoba so zvyškom
vysuší počas 16 h až 20 h v sušiarni pri teplote 103 ±2 °C.
Po vychladnutí v exsikátore sa nádoba so zvyškom odváži s presnosťou na 0,001 g a
spopolní v muflovej peci pri teplote 500 ±20 °C. Popol sa po vychladnutí v exsikátore
odváži s presnosťou na 0,001 g.
4. Výpočet výsledkov
4.1. Obsah nestráveného zvyšku X v % sa vypočíta podľa vzorca
X
=
m
−
m
m
1 2
0
. 100 ,
v ktorom je
m 0 hmotnosť navážky vzorky v g,
m 1 hmotnosť inkubačnej nádoby so zvyškom vzorky po vysušení v g,
m 2 hmotnosť inkubačnej nádoby so zvyškom vzorky po spálení v g.
4.2. Obsah stráviteľnej sušiny Y v % sa vypočíta podľa vzorca
Y = 100 - X ,
113