Inimese embrüonaalsete tüvirakkude kasvatamine maatriksitel ning ...
Inimese embrüonaalsete tüvirakkude kasvatamine maatriksitel ning ...
Inimese embrüonaalsete tüvirakkude kasvatamine maatriksitel ning ...
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
Tabelist 3 on näha, et osa laminiinist ilmselt kleepub filtreerimisel filtri külge.<br />
Kleepumise tõttu kaduma mineva laminiini osakaal on teoreetiliselt seda väiksem, mida<br />
suurem kogus laminiini sisaldavat lahust filtrist läbi lastakse. Tabelist nähtub, et Lm511<br />
tõepoolest kinnitub klaasile, kuid seda vähesel määral. Lm511 kontsentratsioon plaadil,<br />
millele siin töös edaspidi on viidatud, on analüütiline ja lähtub eeldusest, et kõik plaadile<br />
kantud Lm511-l sellele ka kinnitub.<br />
Tabel 3. Lm511 kontsentratsiooni võrdlus enne ja pärast filtreerimist <strong>ning</strong> klaasplaadil inkubeerimist.<br />
Lm511 kontsentratsioon (µg/ml)<br />
Filtreeritud<br />
I<br />
Plaadilt<br />
I<br />
Filtreerimata<br />
II<br />
Filtreeritud<br />
II<br />
Plaadilt<br />
II<br />
14 8 27 22 17<br />
5.3. hESC-de Lm511-l ja Matrigelil <strong>kasvatamine</strong><br />
5.3.1. Kolooniate üldine morfoloogia ja pluripotentsusmarkerite ekspressioon<br />
Rakke kasvatati Matrigelil ja Lm511-l (8, 12, 16, 20 ja 24 µg/cm 2 ), kusjuures eraldi<br />
vaadeldi rakke, mis olid passeeritud MEF-delt ja Matrigelilt. Me eeldasime, et Matrigelilt<br />
passeeritud rakud kinnituvad Lm511-le paremini, sest nad kasutavad Matrigeli<br />
põhikomponendile Lm111-le kinnitumiseks integriini α6β1, mis on ühtlasi ka Lm511<br />
retseptoriks. Meie oletust kinnitab see, et Matrigelilt passeeritud rakud moodustasid palju<br />
väikseid kolooniaid, samas kui MEF-delt passeeritud rakud moodustasid vaid mõned üksikud<br />
kolooniad. Kohe esimesel päeval pärast passeerimist võis mikroskoobis näha kolooniate<br />
morfoloogia erinevusi (vt. joonis 8).<br />
Joonisel 8A on näha, et Lm511-l kasvanud rakud moodustasid tihedaid ja kõrgeid<br />
kolooniaid juba esimesel passeerimisejärgsel päeval. Joonisel 8B võib näha kolooniat, mille<br />
äärtes on rakud ilmselt hakanud diferentseeruma. Joonisel 8C ja 8D olevad kolooniad<br />
kasvavad mõlemad Matrigelil, kuid nad on passeeritud Matrigelilt või MEF-delt. On näha, et<br />
MEF-delt passeeritud koloonias on rakkude vahel vähem rakuvälist maatriksit. Siiski, nii<br />
MEF-delt kui Matrigelilt Lm511-le passeeritud rakud moodustasid tihedaid kolooniad ja ka<br />
MEF-delt Matrigelile passeeritud rakkude kolooniad muutusid kasvatamise käigus<br />
tihedamaks. Rakkudel lasti klaasidel kasvada kokku 7 päeva. Kõige ilusamaid kolooniaid<br />
moodustasid ja kõige paremini kasvasid Matrigelilt Matrigelile passeeritud rakud. Siiski,<br />
kõigil <strong>maatriksitel</strong> leidus ka koledaid ehk tihedaid ja ebakorrapärase kujuga kolooniaid <strong>ning</strong><br />
isegi augulisi kolooniaid. Viimaseid oli Lm511-l palju ja Matrigelil vaid mõni üksik. Lm511-<br />
le külvatud rakud moodustasid omapäraseid kaarjaid paksude äärtega ja jätketega kolooniaid<br />
(vt. joonis 9 ja joonis 10).<br />
34
Change language