Inimese embrÃ¼onaalsete tÃ¼virakkude kasvatamine maatriksitel ning ...

More documents

Recommendations

Info

Joonis 14. hESC-d ekspresseerivad Lm511 rakkude vahele. (Matrigelilt Matrigelile passeeritud rakud, mis on kolm päeva kasvanud.) Sinine – DAPI; Roheline – Nanog; Valge – Lm α5. Suurendus 600x. Joonis 15. Matrigelilt Lm511-le passeeritud rakud, mis on kolm päeva kasvanud. Sinine – DAPI; Roheline – Nanog; Valge – Lm α5. Suurendus 600x. Joonis 16. Matrigelilt Matrigelile passeeritud rakud, mis on kolm päeva kasvanud. Sinine – DAPI; Roheline – Nanog; Valge – Lm α4. Suurendus 600x. 38
6. Arutelu hESC-de jaoks on laminiin 511 oluline valk, mida nad sekreteerivad kasvukeskkonda rakkude vahele ja mis tõenäoliselt hoiab kogu kolooniat terviklikuna. Lm511-l kasvavad tüvirakud on võimelised jagunema ja säilitavad pluripotentsuse, kuid seda mitte nii hästi nagu Matrigelil. Tulevikus oleks huvitav katsetada kasvupinnasena Lm511 ja Matrigeli segu, mis peaks hästi jäljendama embrüonaalset basaalmembraani. Terapeutilisest seisukohast on oluline, et rakud paljuneksid kiiresti, säilitades seejuures pluripotentsuse ja normaalse karüotüübi. Selleks on Lm511-st palju lootustandvamaid maatrikseid, nagu näiteks alginaadil ja kitosaanil põhinevad ja kasvufaktoreid sisaldavad maatriksid. Jääb selgusetuks, kas pluripotentsuse säilitamiseks on tingimata vajalik Lm511 ekspressioon hESC-de rakkude vahel või on see asendatav mõne teise molekuliga. Kirjanduses on esitatud rohkesti materjali erinevatest maatriksitest, mis kõik säilitavad hESCde pluripotentsuse, kuid suhteliselt vähe on teada, milliseid maatriksi valke toiterakud ja hESC-d ise sünteesivad. Käesolevas töös vaadeldi laminiinide α1-, α4-, ja α5-subühikute sünteesi Matrigelil ja Lm511-l kasvavates tüviraku kolooniates. Meie tulemused näitavad, et hESC-d sünteesivad ise sõltumata maatriksist põhiliselt laminiini α5-subühikut sisaldavat laminiini. Matrigelil kasvavad rakud sünteesivad vähesel määral α4-subühikut. Erinevalt Vuoristo jt. (2008) tulemustest, aga sarnaselt Braam jt. (2008) tööga, näitavad meie tulemused, et hESC-d ei sünteesi ise Lm111. Edaspidi võiks uurida laminiini α1- ja α5- subühikute sünteesi ka toiterakkudel kasvavates erinevate tüvirakuliinide kolooniates. Ideaaalne mudel oleks LAMA5-/- tüvirakkude liin. Edaspidi oleks vaja uurida, miks Lm511-l kasvavad tüviraku kolooniad muutuvad kaarjaks ja miks vahel tekib nende keskele auk. Oleks vaja uurida ka, millisel määral hESC-d sünteesivad laminiini α4-subühikut sisaldavaid laminiine. Miyazaki jt. (2008) <strong>ning</strong> Vuoristo jt. (2008) on näidanud siiski, et α4 subühikut kodeeriva mRNA tase hESC-des on väga madal. Samas on Miyazaki ja Vuoristo töödes ka lahknevusi, mis võivad tuleneda erisugustest hESCde liinidest, mida neis töödes kasutati. Erinevalt Miyazaki jt. ei leidnud Vuoristo jt. hESC-de kasvukeskkonnas laminiini β2-subühikut. On võimalik, et hESC-d hakkavad α4-subühikut tootma ja sekreteerima siis, kui nad alustavad diferentseerumist. Seda mõtet toetab asjaolu, et epiteliaalse-mesenhümaalse ülemineku (EMT, epithelial-mesenhymal transition, ingl. k.,) korral toimub laminiini α5-subühiku ekspressiooni langus ja α4-subühiku sünteesi tõus (Takkunen jt. 2008). EMT läbivad ka need rakud, mis migreeruvad läbi Henseni sõlme, et panna alus mesodermile. Seega võiks uurida kuivõrd laminiini α4-subühik kolokaliseerub varaste mesodermaalsete markeritega nagu aktiviin ja Brachyury. 39
Page 1 and 2: TARTU ÜLIKOOL LOODUS- JA TEHNOLOOG
Page 3 and 4: 3.2.1.3.2. hESC-de laminiinil kasva
Page 5 and 6: Dulbecco’ sööde IgG - immunoglo
Page 7 and 8: I Kirjanduse ülevaade. 1. Rakuväl
Page 9 and 10: Rakkude adhesioon, migratsioon ja k
Page 11 and 12: Tabel 1. Laminiinide isovormid, eks
Page 13 and 14: Kuna multipleksiinid sisaldavad gl
Page 15 and 16: Joonis_5. Integriinid ja nende liga
Page 17 and 18: Joonis_6. Proamniootilise õõne mo
Page 19 and 20: 2.2.2. Düstroglükaani ekspressioo
Page 21 and 22: läheduses (Leivo jt. 1980). Kollag
Page 23 and 24: Inimesest pärit fibroblastidel kas
Page 25 and 26: akud muuta surematuks. Luuüdirakku
Page 27 and 28: toodetud laminiini (peamiselt Lm511
Page 29 and 30: jt. 2007). Tulevikus võib kitosaan
Page 31 and 32: 3) 50 mM Tris-HCl (pH=7,2) + 0,1 %
Page 33 and 34: 5. Tulemused 5.1. Puhastatud Lm511
Page 35 and 36: Joonis 8. hESC-d moodustavad juba e
Page 37: 5.3.2. Laminiini subühikute sünte
Page 41 and 42: Kokkuvõte Inimese embrüonaalsed t
Page 43 and 44: Tänusõnad Ma soovin tänada oma j
Page 45 and 46: Chen M., Marinkovich M.P., Veis A.,
Page 47 and 48: Leivo I., Vaheri A., Timpl R., Wart
Page 49 and 50: Takkunen M., Ainola M., Vainionpä

Inimese embrÃ¼onaalsete tÃ¼virakkude kasvatamine maatriksitel ning ...

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?