Download (534Kb) - Repozitorij Medicinskog fakulteta Sveučilišta u ...

3.2 Tkivni microarrayUzorci s dovoljnom količinom i kvalitetom tkiva korišteni su za izradu tkivnogmicroarray (TMA) (183-185). Iz reprezentativne regije tumora, iglom za biopsiju koštanesrži promjera 11G/3.00mm (Somatex, Germany) uzeta su dva cilindra tkiva. Tkivnicilindar je uz pomoć mandrena pažljivo izvađen iz biopsijske igle i stavljen u označenubiopsijsku kazetu. Za izradu TMA svaki cilindar tkiva je prenesen pincetom na prethodnoodređeno mjesto u novom parafinskom bloku te uklopljen u tekući parafin. Pojedini TMAukupno sadrži do dvanaest tkivnih cilindara. Svaki analizirani uzorak tumora, zastupljenje s dva cilindra tkiva reprezentativne regije promjera 2mm, uklopljenih u dva parafinskabloka TMA. TMA rezovi debljine 4µm preneseni su na silanizirana predmetna stakla(DakoCytomation, Denmark) i obojeni standardnom H&E metodom kako bi se provjerilakvaliteta dobivenih cilindara (186-191).Rezovi TMA i standardni rezovi tkiva su jednako obrađeni imunohistokemijskommetodom (192,193) i interfaznom fluorescentnom in situ hibridizacijom.3.3 Imunohistokemijsko bojenjeU imunohistokemijskoj analizi korištena su slijedeća protutijela: CD20(DakoCytomation, Denmark, klon L26, razrijeđenje 1:200), CD3 (DakoCytomation,Denmark, poliklonalno, razrijeđenje 1:50), BCL6 (Novocastra, Newcastle, UK, klonP1F6, razrijeđenje 1:20), CD10 (Novocastra, Newcastle, UK, klon 56C6, razrijeđenje