Download (534Kb) - Repozitorij Medicinskog fakulteta Sveučilišta u ...

fenotipom, a fenotipski uzorci CD10-, BCL6+, MUM1+ i CD10-, BCL6-, MUM1+ ABCfenotipom.3.4 Interfazna fluorescentna in situ hibridizacija (FISH) na parafinskimrezovima tkiva3.4.1 Priprema preparataRezovi tkiva debljine 4µm na silaniziranim predmetnim staklima (DakoCytomation,Denmark) deparafinirani su Histoclear otopinom (National Diagnostics, England) nasobnoj temperaturi tri puta kroz 5 minuta, te zatim isprani u 100% alkoholu na sobnojtemperaturi 2 minute. Rezovi su zatim rehidrirani u seriji alkohola 100%, 85% i 70%,2 minute u svakom i isprani u destiliranoj vodi na sobnoj temperaturi. Nakondeparafinacije rezovi su kuhani u antigen retrieval puferskoj otopini Target Retrieval pH9.0 (DakoCytomation, Denmark) na +95ºC u mikrovalnoj pećnici 15 minuta, zatimtretirani s pepsinom 0.1g/mL (Sigma, Germany) na +37ºC, 20 minuta, te dehidrirani useriji alkohola 70%, 85% i 100%, 2 minute u svakom i osušeni na zraku. Prema uputamaproizvođača pripremljene su direktno obilježene - dvobojna fuzijska proba LSI IgH/BCL2dual color, dual fusion translocatione probe (Vysis Inc., USA) i dvobojna razdvajajućaproba LSI BCL6 dual color, break apart rearrangement probe (Vysis Inc., USA). Nasvaki rez stavljeno je 2µL probe i pokriveno pokrovnicom površine 100 mm 2 koja jeučvršćena ljepilom. Predmetna stakla su stavljena u Hybridizer (DakoCytomation,