Genotyp-Phänotyp Korrelation bei Fanconi Anämie - OPUS ...

Einleitung
1.3 Diagnostik der Fanconi Anämie
1.3.1 Chromosomenbruchanalyse
Typischerweise zeigen kultivierte Lymphozyten von FA-Patienten eine schon
spontan auftretende Chromosomeninstabilität. Es kommt zu einem gehäuften
Auftreten von charakteristischen Chromatidbrüchen und Reunionsfiguren
(Schroeder et al., 1964).
Nach einer Behandlung der FA-Zellen mit alkylierenden, DNA-vernetzenden
Agentien wie Mitomycin C (MMC) oder Diepoxybutan (DEB) erhöht sich die
Häufigkeit von Zellen mit Chromosomenbrüchen (Sasaki et al., 1973; Auerbach,
1993), was die Empfindlichkeit von FA-Zellen gegenüber diesen klastogenen
Substanzen bestätigt.
1.3.2 Durchflusszytometrie
Neben der erhöhten Chromosomenbrüchigkeit und Klastogensensitivität kommt
es bei FA-Zellen zu Zellzyklus-Störungen (Dutrillaux et al., 1982; Kubbies et al.,
1985), die sowohl die S- als auch die G2-Phase betreffen. Die Zellzyklus-
veränderungen werden als Manifestation von DNA-Schäden interpretiert
(Berger et al., 1993; Seyschab et al., 1993), deren Reparatur und Replikation im
Verlauf der S-Phase nicht regelrecht abgeschlossen wird (Akkari et al., 2001).
Mit Phytohämagglutinin (PHA) stimulierte mononukleäre Blutzellen
(Lymphozyten) werden für 72 Stunden kultiviert, anschließend angefärbt, die
Zellkerne durchflusszytometrisch vermessen und die so erhaltenen
Zellzyklusverteilungen elektronisch analysiert. Im Vergleich zu gesunden
Individuen kommt es bei FA-Patienten aufgrund unzureichend reparierter DNA-
Schäden zu einer typischen G2-Phasen-Akkumulation von Zellen (Miglierina et
al., 1991).
Der Verdacht auf einen Mosaikstatus, d.h. die gleichzeitige Existenz von
funktionell defekten als auch intakten Zellen im Körper des Betroffenen, besteht
bei anhaltender Diskrepanz zwischen zytogenetischen und klinischen
Befunden.
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