Graduiertenkolleg 592 Lymphozyten - DFG-Graduiertenkolleg 1660

lich die durch das Transgen codierte µH-Kette. Pro-B-Zellen werden aus einer dTg-Maus, der
Tetrazyklin im Trinkwasser verabreicht wurde (→ µH-Kettensynthese abgeschaltet), durch
eine magnetische Isoliertechnik mit einem Antikörper gegen das B-Lymphozyten-spezifische
Oberflächenprotein CD19 isoliert (Ausbeute pro Maus ca. 1-2 Millionen Pro-B-Zellen), gewaschen
und auf Stromazellen in An- (→ µH-Synthese ist angeschaltet) bzw. Abwesenheit
von Tetrazyklin (→ µH-Kettensynthese ist abgeschaltet) für 6 bzw. 48 hrs zur Messung von
Kurz- bzw. Langzeiteffekten kultiviert. Danach werden B-lymphoide Zellen durchflußzytometrisch
mit einem Fluoreszenz-konjugiertem Antikörper gegen CD19 sortiert und entweder
zur Gesamt-RNA-Isolierung bzw. zur Generierung zellulärer Proteinlysate verwendet. Kommerziell
erworbene DNA-Chips (Affymetrix) werden mit der isolierten und Fluoreszenzmarkierten
Gesamt-RNA hybridisiert und in einem CHIP-Lesegerät ausgewertet. Die letztere
Analyse soll von dem Doktoranden im Labor von Prof. Möröy (Universität Essen), der diese
Methode bereits etabliert hat, durchgeführt werden.
Analog sollen Proteinmuster mittels der 2D-Gelelektrophoresetechnik, die in unserem
Labor bereits mit dem System von Amersham-Pharmacia erfolgreich etabliert wurde, ermittelt
werden. Dazu werden Zell-Lysate aus 10 6 induzierten (→ µH-Ketten-Synthese ist angeschaltet)
bzw. nicht-induzierten (→ µH-Kettensynthese ist abgeschaltet) Pro-B-Zellen in einem
2D-Gelsystem aufgetrennt und Proteine über eine Färbung der Gele entweder mit Silber oder
Coomassie Blue nachgewiesen. Die Proteinmuster werden mit Hilfe der Image-Master 2D
Software (Amersham-Pharmacia) ausgewertet und miteinander verglichen. Die Identität von
qualitativ und quantitativ unterschiedlichen Proteinspots wird entweder massenspektroskopisch
oder durch Bestimmung der partiellen N-terminalen Proteinsequenz ermittelt (durch die
Firma Toplab, München). Die daran anschließende Charakterisierung unbekannter Gene, deren
Expression durch Prä-B-Zellrezeptorsignale kontrolliert wird, konzentriert sich zuerst auf
solche, die für potentielle Transkriptionsfaktoren und Tyrosin-, Serin-, und Threoninkinasen
bzw. -phosphatasen kodieren.
Eigene, für das Projekt relevante Publikationen (Auswahl):
Bradl, H. and H.-M. Jäck (2001). Surrogate light chain mediated interaction of the pre-B cell receptor with
adherent cells. J. Immunol. 167, 6403-11.
Hess, J., Müller, A., Wirth, T., Melchers, F, Jäck, H.-M. und Winkler, T. (2001). Induction of Pre-B Cell Proliferation
Following De Novo Synthesis of the Pre-B Cell Receptor. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 13;98,
1745-50.
Kline, G.H., Hartwell, L., Beck-Engeser, G.B., Keyna, U., Zaharevitz, S., Klinman, N.R., and Jäck, H.-M..
(1998). Pre-B Cell Receptor-Mediated Selection of Pre-B Cells Synthesizing Functional µ Chains. J.
Immunol. 161,1608.
16
• GRK 592: Lymphozyten - Differenzierung, Aktivierung und Deviation •