Graduiertenkolleg 592 Lymphozyten - DFG-Graduiertenkolleg 1660

Knockoutmäusen eingebracht werden. Nach Sortierung GFP-positiver Zellen sollen diese in
vitro oder nach Retransfer in IL-4R-/- Mäuse in vivo untersucht werden Die Expression von
IL-4R Mutanten in primären naiven CD4-positiven IL-4R-negativen T Zellen soll insbesondere
die Rolle von IL-4R Signalen bei der Th2 Differenzierung in vitro aufklären.
Beschreibung des Promotionsthemas:
Die Mutanten des Maus IL-4R wurden bereits in bicistronische retrovirale Vektoren
(MSCV2.2) inseriert, die parallel zur Expression des IL-4R die Expression des grün fluoreszierenden
Proteins (GFP) erlauben. Hierdurch können erfolgreich transfizierte Zellen im
FACS und mittels Immunfluoreszenzmikroskopie identifiziert und durch Zellsortierung angereichert
werden.
1) Es sollen IL-4R-GFP Retroviren mittels der PHOENIX-Verpackungszellinie hergestellt
werden und an Zellinien funktionell vorgetestet werden.
2) Im zweiten Abschnitt sollen die Retroviren zum Transfer der IL-4R Mutanten in primäre
CD4 positive T Zellblasten von IL-4R Knockoutmäusen benutzt werden. GFPpositive
Zellen sollen dann in vitro durch Verwendung von IL-4 bzw. IL-12 in Th1
bzw. Th2 Zellen differenziert werden. Diese Experimente sollen erstmals Aufschluß
darüber geben, welche der schon länger bekannten (STAT-6, JAK-1, IRS-1/2) oder
von uns neu definierten IL-4R Signaltransduktionskomponenten (p39, p62lck, JAB-1)
für die Entstehung von Th2 Zellen essentiell sind.
3) Parallel zu den Arbeiten mit T Zellen sollen aus dem Knochenmark von IL-4Rdefizienten
Mäusen gewonnene Zellen mit den IL-4R-kodierenden Retroviren infiziert
werden. GFP-positive Zellen sollen dann in letal-bestrahlte IL-4R -/- Empfänger Mäuse
transferiert werden. Nach Erfahrungen in anderen Labors kann hierbei eine Expression
von GFP zusammen mit dem kotransferierten Gen in ca. 30-40 % aller hämatopoetischen
kernhaltigen Zellen erreicht werden. Ziel ist die Analyse GFP-positiver
Zellen aus den so generierten Knochenmarkchimären, die keinen endogenen sondern
nur den jeweilig gezielt mutierten IL-4R exprimieren. Hierbei ist die Untersuchung
von drei verschiedenen Zelltypen geplant:
a) Durch Zellsortierung gereinigte B Zellen sollen in vitro hinsichtlich der durch IL-
4 und anti-CD40 (Klon FGK) induzierten Proliferation und IgE Synthese untersucht
werden.
b) Bei aus dem Peritoneum von Mäusen nach Injektion von Thioglykollat gewonnenen
Makrophagen soll die IL-4 vermittelte Verstärkung der Abtötung von Mikroorganismen
sowie die IL-4-vermittelte Inhibition von PGE2 und IL-12 Synthese
nach LPS/IFN-γ Stimulation untersucht werden.
c) Aus dem Knochenmark der chimären Mäuse sollen außerdem durch Zugabe von
GM-CSF und IL-4 reife dendritische Zellen generiert werden, um herauszufinden,
welche Signale für diese IL-4 Funktion erforderlich sind.
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• GRK 592: Lymphozyten - Differenzierung, Aktivierung und Deviation •