Ute Hoffmann, BNI Hamburg - Förderverein der Biologieolympiade

Inhaltsverzeichnis
1 Die Rahmenbedingungen des Praktikums 4
2 Hintergrundwissen 5
2.1 Zu den Themen der Arbeitsgruppe . . . . . . . . . . . . . . . 5
2.2 Zu meinem Projekt . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
3 Materialien und Methoden 9
3.1 Transfektion und Handhabung der CHOs . . . . . . . . . . . . 9
3.1.1 Kultivierung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9
3.1.2 Überprüfung der Plasmide . . . . . . . . . . . . . . . . 9
3.1.3 Transfektion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
3.2 Proteinherstellung mittels der Bakterien . . . . . . . . . . . . 12
3.2.1 Transformation der Bakterien . . . . . . . . . . . . . . 12
3.2.2 Proteingewinnung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
3.2.3 Proteinaufreinigung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14
4 Ergebnisse 15
4.1 Ergebnisse der Arbeiten mit den CHOs . . . . . . . . . . . . . 15
4.1.1 Überprüfung der Plasmide . . . . . . . . . . . . . . . . 15
4.1.2 Transfektion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
4.2 Ergebnisse der Arbeiten mit den Bakterien . . . . . . . . . . . 20
4.2.1 Proteingewinnung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
4.2.2 Proteinaufreinigung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22
4.2.3 Western-Blot zur Identizierung von TRAP-H . . . . . 24
5 Diskussion 25
5.1 Diskussion der Ergebnisse der Arbeiten mit den CHOs . . . . 25
5.1.1 Überprüfung der Plasmide . . . . . . . . . . . . . . . . 25
5.1.2 Transfektion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25
5.2 Diskussion der Ergebnisse der Arbeiten mit den Bakterien . . 26
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