inaugural – dissertation - Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg

Inhaltsverzeichnis
XII
2.1.9 Mauslinien ........................................................................................................ 46
2.1.10 Antikörper ........................................................................................................ 48
2.1.11 Peptide .......................................................................................................... 50
2.1.12 PCR-Primer....................................................................................................... 50
2.1.13 Phosphothioat-stabilisiertes Oligodesoxynukleotid ................................................ 50
2.1.14 Datenbanken/Software ...................................................................................... 50
2.2 Molekularbiologische Methoden.................................................................... 51
2.2.1 Transformation von E.coli .................................................................................. 51
2.2.2 Plasmid-Präparation........................................................................................... 51
2.2.3 Isolierung von DNA aus der Schwanzspitze von Mäusen ....................................... 52
2.2.4 PCR .......................................................................................................... 52
2.2.5 Auftrennung von DNA-Fragmenten im Agarose-Gel (DNA-Gelelektrophorese) ......... 53
2.3 Proteinbiochemische Methoden .................................................................... 54
2.3.1 SDS-Polyacrylamidgelelektrophorese (SDS-PAGE)................................................. 54
2.3.2 Western Blot..................................................................................................... 55
2.4 Zellbiologische Methoden.............................................................................. 56
2.4.1 Lagerung und Kultur von Zelllinien...................................................................... 56
2.4.2 Einfrieren und Auftauen von Zellen ..................................................................... 56
2.4.3 Transfektion von RMA-Zellen.............................................................................. 56
2.5 Tierexperimentelle Arbeiten.......................................................................... 57
2.5.1 Injektion von DT ............................................................................................... 57
2.5.2 Organentnahme bei Mäusen............................................................................... 58
2.5.3 Präparation von Organen für FACS, MACS oder zelluläre Assays ............................ 58
2.5.3.1 Präparation von Milz-, Knochenmark- und Lymphknotenzellen ............................ 58
2.5.3.2 Präparation der Lunge .................................................................................... 60
2.5.3.3 Präparation von Epidermis und Dermis ............................................................. 60
2.5.3.4 Präparation und Kultur von BMDC .................................................................... 61
2.5.4 Isolierung von peripheren Blutlymphozyten zur Typisierung von
transgenen Mäusen ........................................................................................... 62
2.6 Immunologische Methoden........................................................................... 62
2.6.1 Extrazelluläre FACS-Färbung .............................................................................. 62
2.6.2 Intrazelluläre FACS Färbung ............................................................................... 63
2.6.3 In vitro-Restimulation von T-Zellen zum Nachweis der IFNγ-Ausschüttung ............. 64
2.6.4 Bestimmung der Leukozytenanzahl und DZ-Depletion........................................... 64
2.6.5 Isolierung von Zellpopulationen mittels Magnetpartikel ......................................... 67
2.6.6 CFSE-Markierung von Milzzellen.......................................................................... 67
2.6.7 In vitro-Proliferation und Stimulation................................................................... 68
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