inaugural – dissertation - Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg

2 Material und Methoden 46
CaCl 2 (wasserfrei) 200 1,8
Fe(NO 3 ) 3 x9H 2 O 0,1 0,000248
MgSO 4 (wasserfrei) 97,67 0,814 48,84 0,407
KCl 400 5,33 400 5,33
NaCl 6400 110,34 6000 103,45
Na 2 HPO 4 (wasserfrei) 800 5,63
NaH 2 PO 4 xH 2 O 125 0,906
andere Komponenten
D-Glukose (Dextrose) 1000 5,56 2000 11,11
Glutathion (reduziert) 1 0,00326
Phenolrot 15 0,0399 5 0,0133
Na-Pyruvat 110 1
ergänzende Zusätze
Fötales Kälberserum 10% 10%
Penicillin/Streptomycin 100 U/ml 100 U/ml
Glutamin 2 2
β-Mercaptoethanol 0,1
Die Grundmedien wurden durch die ergänzenden Zusätze verfeinert (Tabelle 2.3). Bei
Fötalem Kälberserum (FKS) musste vor Gebrauch eine Erhitzung für ca. 45 min bei
56 °C vorgenommen werden, um die enthaltenen Komplementfaktoren zu inaktivieren.
Das im Grundmedium enthaltene L-Glutamin ist instabil und musste daher dem
Vollmedium nach 2 Wochen erneut zugegeben werden.
2.1.9 Mauslinien
Alle Mäuse wurden in den Tierställen des DKFZ in Heidelberg, bei einem Hell-Dunkel-
Rhythmus von 12 h gehalten und hatten ad libitum Zugang zu Futter und Trinkwasser.
OT-I-Mäuse exprimieren einen transgenen TZR Vα2 und Vβ5, der H-2K b zusammen mit
dem Ovalbumin-Peptid 257-264 (SIINFEKL) erkennt. Bei Thy1.1 handelt es sich um ein
Allel des T-Zellmarkers CD90 (Thy1). Durch das Thy1.1-Allel können T-Zellen einer
Spendermaus (hier Thy1.1) von denen einer Empfängermaus (Thy1.2 bei C57BL/6-
Mäusen) unterschieden werden.
Bei den OT-II-Mäusen handelt es sich um einen Mausstamm auf C57BL/6-Hintergrund,
der einen transgenen TZR Vα2 und Vβ5 exprimiert, welcher I-A b zusammen mit dem
Ovalbumin-Peptid 323-339 (ISQAVHAAHAEINEAGR) erkennt. OT-II-Mäuse sind
heterozygot für Thy1.1. OT-I- und OT-II-Mäuse wurden freundlicherweise von Prof. Dr.
Thomas Schüler (Otto-von-Guericke Universität, Magdeburg) zur Verfügung gestellt.
Materialien