inaugural – dissertation - Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg

1 Einleitung 38
Die einzelnen Teile des Fusionsproteins sind über kurze Linker (2 Aminosäuren)
miteinander verbunden. Das Einfügen des Ovalbumingens ermöglicht die Untersuchung
der Toleranzinduktion gegen Ovalbumin. Die eGFP-Expression dient als Marker für die
Transgen-Expression in den CD11c + -Zellen.
Das Konstrukt wurde mittels homologer Rekombination in ein BAC (Bacterial Artificial
Chromosome) eingefügt, welches das Maus-CD11c-Gen mit Promotor enthält. Dadurch
wird die Expression des Transgens unter dem endogenen Promotor erreicht. Da der
Promotor durch lange Segmente der endogenen natürlichen DNA-Sequenz umgeben
ist, wird wie bereits von Lee et al. gezeigt, eine zuverlässige Expression der
Genkonstrukte erzielt und somit eine hohe Zellspezifität erreicht (Lee, Yu et al., 2001).
Dies stellt die Methode mit der Erzeugung von zeitaufwendigen knock-in Mäusen
gleich. Weitere Vorteile hierbei sind: (1) gewebespezifische Expression, da Genspezifische
regulatorische Elemente im BAC enthalten sind und (2) mit dieser Technik
muss nur eine geringe Anzahl an verschiedenen transgenen Linien erzeugt werden, da
in 20-70 % der Linien die Integration des intakten BAC erfolgt. Eine schnellere
Etablierung des Mausmodells ist somit möglich.
1.6 Ziele dieser Arbeit
Die von Dr. Steffen Jung mit konventioneller transgener Technologie hergestellten
CD11c.DTR-Mäuse sterben schon nach 3 DT-Injektionen. Daher wurde in unserem
Labor ein neues verbessertes Tiermodell zum Studium der DZ-Funktionen initiiert.
Das Ziel der Doktorarbeit war es, das neue BAC transgene CD11c.DOG-Mausmodel
zunächst einer detaillierten Charakterisierung zu unterziehen. Dies beinhaltete den
Nachweis der Transgenexpression in den verschiedenen, erhaltenen Linien und die
Überprüfung der Funktionalität der Fusionsproteinbestandteile. Weitergehend sollte ein
potentiell toxischer Einfluss von DT auf die Mäuse, hinsichtlich einer wiederholten,
längeren DT-Gabe untersucht werden. Aufgrund des stark verbreiteten Vorkommen der
DZ sollten die Depletionsergebnisse in den verschiedenen Organen (Milz,
Lymphknoten, Knochenmark und Thymus, aber auch in den nicht lymphoiden
Organen) analysiert werden. Auch die Depletionseffizienz der verschiedenen DZ-
Subpopulationen sollte kontrolliert werden, um die „Qualität“ des Mausmodells in
dieser Hinsicht zu dokumentieren. Eine Kinetik der DZ-Depletion und Titration des DT
zur Bestimmung der optimalen Depletionsparameter (bezüglich Menge und Zeitpunkt
der DT-Injektionen) vervollständigen die Analyse des Tiermodells. Weiterhin sollte der
Ziele dieser Arbeit