inaugural – dissertation - Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg

1 Einleitung 36
Im Gegensatz zu menschlichen Zellen oder Affen-Zellen kann DT in Mauszellen nicht an
den DTR binden, da dieser eine mindestens 10 5 -fach geringere Affinität für das DT
besitzt (Pappenheimer, Harper et al., 1982). Die Ursache dafür sind drei
Aminosäureänderungen in der extrazellulären EGF-like Domäne des murinen DTR,
welche für die Bindung der B-Untereinheit des DT nötig sind (Mitamura, Umata et al.,
1997). Insgesamt besitzt der humane DTR eine etwa 80%-ige Homologie zum murinen
DTR (Mitamura, Higashiyama et al., 1995; Naglich, Metherall et al., 1992).
Die Halbwertszeit von DT beträgt etwa 4,5 h in Mäusen (Sung, Youle et al., 1990). Bei
der Ermittlung der Halbwertszeit wurden 2 pmol DT iv. in Mäuse gespritzt. Dies
entspricht, bei der verwendeten Menge von 8 ng/g KG DT, bei einer 20 g Maus einem
7500-fachen Überschuss. Dies ergab eine Pharmakokinetik mit 1/10 der ursprünglichen
Plasma-DT Menge nach 4 h und 1/100 nach 15 h. 24 h nach der DT-Gabe ist noch ca.
1/850 im Plasma vorhanden.
In der hier vorliegenden Arbeit soll dieses System genutzt werden, um in einer
transgenen Maus spezifisch DZ zu depletieren. Dazu wurde der menschliche DTR unter
die Kontrolle eines DZ-spezifischen Promotors gestellt. Werden der Maus geringe DT-
Mengen gespritzt, so binden nur die transgenen DZ, welche den humanen DTR
exprimieren, DT und sterben, während andere DTR - Zellen keinem DT-Einfluss
unterliegen.
Die Vorteile dieses Systems sind:
- hohe Affinität des DT für den DTR (K a für humanen DTR 3,6x10 8 M -1 (Mitamura,
Higashiyama et al., 1995)),
- auch ruhende, nicht proliferierende Zellen werden abgetötet, z.B. DZ.
Als DZ-spezifischer Promotor wurde CD11c genutzt. Bezüglich der Spezifität von CD11c
für DZ ist zu bemerken, dass eine starke CD11c-Expression ausschließlich bei DZ zu
beobachten ist. CD11c stellt den momentan spezifischsten Marker für DZ dar. Lediglich
spezielle Subpopulationen von CD8 + T-Lymphozyten (aktivierte intraepitheliale CD8 + T-
Zellen) und NK-Zellen sind als CD11c + -Zellen (natural killer dendritic cells - NKDC)
beschrieben (Huleatt und Lefrancois, 1995; Pillarisetty, Katz et al., 2005; Werfel, Witter
et al., 1991). CD11c ist das Integrin α x Transmembranprotein, welches mit dem
Integrin β 2 (CD18) assoziiert und den Komplementrezeptor 4 bildet. Die CD11c/CD18-
Funktionen sind vielfältig. Es stellt einen Rezeptor für den inaktiven Komplementfaktor
Systeme zur Eliminierung von Immunzellen