Aus der Klinik für Plastische Chirurgie der Universität zu Lübeck ...
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Abbildung 5: präkonfluente Zellen Abbildung 6: konfluente Zellen<br />
Phasenkontrastmikroskopie: 50fache Vergrösserung<br />
3.2.4 Adenovirale Transfektion<br />
Wesentlicher experimenteller Bestandteil dieser Arbeit war die Transfektion <strong>der</strong> aus dem<br />
Nativgewebe gewonnenen Fibroblasten mit einem vektortragenden Adenovirus. Nur Zellen<br />
mit <strong>der</strong> neuen rekombinanten Kerninformation waren später da<strong>zu</strong> in <strong>der</strong> Lage, VEGF 165 in das<br />
Gewebe frei<strong>zu</strong>setzen und die gewünschten klinischen Effekte hervor<strong>zu</strong>bringen. Das hier <strong>zu</strong>r<br />
Anwendung kommende Verfahren des zellbasierten Gentransfers wurde von Herrn Professor<br />
Machens entwickelt und genießt internationalen Patentschutz (PTC/EP 03/01766).<br />
Sämtliche Arbeiten erfolgten unter streng sterilen Kautelen in einem Labor <strong>der</strong><br />
Sicherheitsstufe 2 mit einem Unterdruckluftsystem <strong>zu</strong>m Absaugen <strong>der</strong> Luft an jedem<br />
Arbeitsplatz.<br />
Nachdem die Zellen über drei Zellpassagen kultiviert waren, wurde in einer Phase, in <strong>der</strong> die<br />
Zellen gerade konfluent waren, das Medium abpipettiert und 4ml einer Suspension aus PBS,<br />
2% FCS und Adenovirus da<strong>zu</strong>gegeben. Danach wurden die Flaschen <strong>für</strong> eine Stunde unter<br />
Abschirmung von UV- Licht auf die Schwenkbank gestellt. Hinterher wurde je 21 ml<br />
Vollmedium da<strong>zu</strong>pipettiert und die Flaschen wurden wie<strong>der</strong> über Nacht in den Brutschrank<br />
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