Aus der Klinik für Plastische Chirurgie der Universität zu Lübeck ...

Duration of expression ( Dauer der Genepression).
Diese Kriterien werden von unserem Modell erfüllt, da
� die transfizierten Zellen genau in das Zielgebiet gebracht werden
� der von uns benutzte Vektor eine hohe Transfektionseffizienz besitzt (nämlich 88%)
und dass die daraus resultierende Proteinproduktion sowohl in vitro als auch in vivo
transient ist
� die Proteinproduktion vor Implantation der Zellen gemessen werden kann
� eine klinisch signifikante Wirksamkeit in diesem Modell nur bei Behandlung des
Zielgebiets eine Woche vor Ischämie und nur unter Einbeziehung des umgebenden
Gewebes erzielt werden kann
� auch in den Langzeitversuchen die Gefäßbildung nur transient ist und ein negativer
Effekt nicht gesehen werden konnte
Für die Monotherapie mit VEGF 165 konnten wir das optimale Timing und das optimale Gebiet
für die Behandlung mit VEGF 165 für dieses Modell aufzeigen. Eine Verbesserung der
Durchblutungssituation konnte in diesem Modell nur bei Vorbehandlung des Zielgebiets
erreicht werden, was eine Anwendung dieses Modells nur bei elektiven Eingriffen und nicht
in akuter Ischämiesituation möglich macht. In wieweit jedoch diese Ergebnisse auf größere
Tiere und Menschen übertragbar sind, muss noch gezeigt werden.
6. Zusammenfassung
Ziel dieser tierexperimentellen methodologischen Arbeit war es, ein Verfahren zum zell-
basierten Gentransfer isogener Fibroblasten der Ratte zwecks temporärer Expression von
VEGF in einem etablierten Lappenmodell der Ratte anzuwenden. Dazu wurde ein spezieller
bicistronischer adenoviraler Vektor in der GBF Braunschweig hergestellt
(padcos45VEGFsequieG) und in einem S2 Labor der KEF/Campus Lübeck verwendet.
Isogene Sprague-Dawley Fibroblasten wurden isoliert und zunächst das
Transfektionsverfahren in vitro optimiert. Dafür wurden bei verschiedenen MOIs die
Transfektionsraten der Zielzellen und die resultierende Expression von VEGF in vitro
bestimmt. Es zeigte sich, dass bei einer MOI von 100 das optimale Expressions-,
Transfektionsverhältnis bei erhaltener Zellvitalität zu erreichen war. Das
Expressionsmaximum lag bei 3-5 Tagen nach Transfektion bei einer Gesamtexpressionsdauer
von 7 Tagen. Für die folgenden in vivo Experimente wurde daher eine MOI von 100 genutzt.
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