Olfaktorische Rezeptoren mit speziellen topographischen ...

Material und Methoden
Das Signal der Messelektrode wurde 100 fach. Anschließend durchlief das Signal
einen 20 Hz Tiefpassfilter und wurde direkt in den Analog/Digitalwandler
eingeschleust. Ein Signal des Picospritzers wurde zur Bestimmung des Zeitpunks der
Duftstoffzugabe ebenfalls in den Analog/Digitalwandler eingeschleust und im
Computer aufgezeichnet.
2.16.2 Präparation
Die Mäuse wurden durch Genickbruch getötet um eine pH-Wert Änderung im Mucus
des Nasenepithels durch eine CO2 Begasung zu vermeiden. Nach dem Abtrennen
des Kopfes wurden die Schädel halbseitig aufpräpariert um die medial gelegenen
Anteile der Turbinale offenzulegen. Dabei wurden ebenfalls beide Os Nasale sowie
die contralateralen Os Lacrimale und Os Frontale um den Bulbus olfactorius entfernt.
Auf diesen wurde zur besseren elektrischen Leitung der Referenzelektrode ein
Tropfen 1%iger Agarose in Ringer aufgetragen. Während der gesamten Messung
wurde das Epithel mit einem Strom wasserdampfgesättigter Luft (2L/min) überströmt.
Die feuchte Luft wurde in zwei in Reihe geschalteten Waschflaschen generiert.
2.16.3 Messung
Die Messung erfolge mit einer chlorierten Silberelektrode die in eine mit 1%igem „low
melting Agarose“ gefüllte Glaskapillare eingeführt wurde. Als Referenz diente eine
chlorierte Silberelektrode in einer mit Ringer gefüllten Glaskapillare, die in einem
Agarosetropfen auf dem contralateralen Bulb eingestochen wurde. Die Widerstände
der Glaskapillaren betrugen zwischen 2 und 5 MOhm. Nach Berühren des Epithels
mit der Glaskapillare der Messelektrode wurde das Epithel zur Regeneration 5
Minuten nur mit feuchter Luft überströmt. Die Zugabe des Duftstoffes erfolge 100
msec lang direkt in den permanenten Strom wasserdampfgesättigter Luft mit 4
ml/min. Dazu wurde 1 µl des Duftstoffes auf ca. 1 cm 2 Filterpapier in einer
Pasteurpipette aufgetragen. Die Steuerung der Duftstoffzugabe erfolge mit einem
Picospritzer II.
Zur Bestimmung der Reaktion des haupolfaktorischen Epithels innerhalb und
außerhalb des Patches auf die ausgewählten Duftstoffe wurde folgendes
Messprotokoll verwendet:
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