Kozulovic2005_Dissertation.pdf - Uni Greifswald - Ernst-Moritz-Arndt ...

3. Material und Methoden 22
Firma Ventana. Dieser Automat arbeitete mit einem Barcodesystem für Objektträger
und Reagenzien (siehe Tabelle 2), wodurch eine automatische Zuordnung gegeben war.
Der vorprogrammierte Ablauf wurde gewählt und dementsprechend die dazugehörigen
Barcodes gedruckt. Die Objektträger wurden mit Barcodes beklebt und horizontal in
den Automaten eingelegt. Bei gleichzeitig ablaufenden Arbeitsschritten wurden die zur
Zeit- und Materialoptimierung bereits eingelegten Objektträger mit dem Puffer eingedeckt.
Somit wurde ungewolltes Austrocknen verhindert. Nach dem Startcheck wurde
der Beginn der immunhistochemischen Färbung bestätigt. Diese erfolgte horizontal bei
37° C in einer Blackbox mit dem patentierten Vortex-Mix.
Tabelle 2: Reagenzien im modularen System - Ventana - Nexes
Reagenzien
1 Dispenser (25ml) Inhibitor Solution; Hydrogen peroxide
1 Dispenser (25ml) Universal Biotinylated Ig; Sekundary Antibody
1 Dispenser (25ml) Avidin-HRPO
1 Dispenser (25ml) Hydrogen Peroxide
1 Dispenser (25ml) Substrate Solution; DAB
1 Dispenser (25ml) Copper Sulfate Solution
1 Dispenser (25ml) Hematoxylin
1 Dispenser (25ml) Bluing Reagent
1 Dispenser (variabel >2ml) Anti - P-gp JSB-1 (Verdünnung 1:20)
Nachdem die Objektträger mit einer definierten Menge Reaktionspuffer (zehnfache
Verdünnung) und einem Ölfilm (Liquid Coverslip) versehen wurden, entstand eine homogene
„Reaktionskammer“ über dem gesamten Objektträger (siehe Abb. 8).