Universidad Austral de Chile - Tesis Electrónicas UACh ...

hielo por 5min, para luego centrifugar a 16.000 x g por 3min. El sobrenadante que
contenía el ADN se transfirió a un tubo microcentrífuga limpio de 1,5mL y se agregó
600µL de isopropanol a temperatura ambiente para precipitar el ADN, se mezcló
lentamente invirtiendo el tubo hasta observar filamentos de ADN y se centrifugó a
16.000 x g por 2min. El sobrenadante se extrajo cuidadosamente y se secó el tubo en
papel absorbente limpio. Una vez seco el pellet de ADN, éste se lavó con 600µL de
etanol al 70% a temperatura ambiente, invirtiendo el tubo suavemente varias veces,
posteriormente centrifugar 16.000 x g por 2min y descartar el sobrenadante. El
sedimento de ADN se secó al aire por 15min.
Al observar el sedimento de ADN seco, se rehidrató agregando 100µL de la solución
de rehidratación al tubo, incubando durante la noche a temperatura ambiente o a 4ºC.
Finalmente, el ADN resuspendido se almacenó a 4ºC.
FIGURA 5 Protocolo de extracción del ADN genómico de las cepas de Bacillus.
FUENTE: Elaboración propia.
3.3.3 Amplificación del gen ribosomal 16S. Las cepas de Bacillus se identificaron
mediante la secuenciación del gen ARNr 16S, por medio de la amplificación por PCR.
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