Universidad Austral de Chile - Tesis Electrónicas UACh ...

De la medición obtenida en el equipo NANODROP 2000, se puede apreciar
cuantificación de ADN genómico extraído en las muestras de las cepas 1g; 20; 22; 87 y
92, mientras que en las muestras 67; 95 y 97, el equipo no logró obtener una medición,
lo cual pudo deberse al límite de detección que el equipo posee, el cual va de los 2-
15.000ng/µl.
Debido a los anillos aromáticos que poseen las bases nitrogenadas del ADN, éste tiene
por absorbancia máxima 260nm, mientras que en las proteínas la absorbancia es
medida a 280nm, por ende la determinación de la pureza y calidad del ADN, se
determinó utilizando la razón de ambas absorbancias (260nm/280nm), con valores que
deben estar por sobre 1,7, como sucede con las cepas 1g; 20; 22; 87 y 92.
4.3 Amplificación del gen ARNr 16S por medio de PCR
El gen 16S fue amplificado por PCR a partir de ADN obtenido desde células
vegetativas de cepas del género Bacillus. Para ello se utilizaron partidores universales
UN y EB descritos por BARRY et al., (1990).
Producto de la amplificación se obtuvo un fragmento de 1.500 pb, correspondiente al
tamaño del gen ANRr 16S. Varias investigaciones han revelado que la secuencia del
gen ARNr 16S presenta regiones conservadas y entre ellas se encuentran regiones
que son variables, que han sido útiles para la diferenciación de género y especie en
bacterias (JENSEN et al., 1993).
En la FIGURA 13 se observa la separación en el gel de agarosa de los productos de la
amplificación del gen de ADNr 16S de cada cepa, los que en todos los casos, al ser
comparados con el estándar de ADN, corresponden a los 1.500 pb aproximadamente,
descritos en la literatura por BARRY et al., (1990).
Este producto PCR se obtuvo en todas las cepas en estudio, aún en las que no se
había obtenido cuantificación de concentración de ADN genómico en el equipo
NANODROP 2000, dando cuenta que no es necesario grandes cantidades de ADN
para realizar la amplificación. La especificidad de la reacción fue determinada al no
observar productos de amplificación inespecífica en el control negativo.
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