Universidad Austral de Chile - Tesis Electrónicas UACh ...

Los partidores que se utilizaron para la amplificación fueron los siguientes: UN5´ACG
GAT ACC TTG TTA CGA GTT 3´ y EB 5´AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG 3´,
capaces de amplificar el gen 16S de cualquier eubacteria. Los componentes,
volúmenes y concentraciones para la mezcla de PCR utilizados, se detallan a
continuación en el CUADRO 3.
CUADRO 3 Mezcla utilizada en la reacción de PCR para amplificar el gen ARNr
16S.
Componentes Concentración Volumen (µL) Concentración final
Buffer PCR 10x 5,0 1x
MgCl2 25mM 6,0 3,0mM
dNTPs 10mM c/u 2,0 0,4mM c/u
Primer 1 50pmol/µL 1,0 1,0µM
Primer 2 50pmol/µL 1,0 1,0µM
ADN Taq polimerasa 5 U/µL 0,2 1,0 U/µL
ADN templado 100ng aprox. 5,0 -
Agua desionizada,
estéril
- 32,8 -
Volumen final - 50,0 -
FUENTE: Elaboración propia.
El programa de amplificación que se utilizó en el termociclador, es el que se detalla a
continuación:
Desnaturalización inicial 3min a 95ºC
Posteriormente 35 Ciclos de PCR:
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