DOSAGE IMMUNORADIOMETRIQUE POUR LA DETERMINATION QUANTITATIVE DE LA FERRITINE DANS LE SERUM HUMAIN. POUR DIAGNOSTIC IN-VITRO APPLICATIONS CLINIQUES La molécule de Ferritine est constituée de 24 sous-unités protéiques. Chacune de ces unités a un poids moléculaire de 20000 Da. La fon<strong>ct</strong>ion primaire de la Ferritine est d'accumuler le fer intracellulaire en protégeant la cellule des effets toxiques du métal libre et de constituer une réserve de fer rapidement disponible. Dans l'organisme humain, la plus grande concentration de Ferritine se trouve dans les cellules du foie et dans les cellules du système endothélial du foie, de la rate et de la moelle osseuse. Des quantités moindres se trouvent aussi dans le coeur, le pancréas et les reins. Des quantités faibles, mais non négligeables, de Ferritine se trouvent aussi dans le sérum humain. La fon<strong>ct</strong>ion de la Ferritine sérique n'est pas connue, mais il y a une relation très étroite entre la concentration de cette protéine dans le sérum humain et les dépôts de fer de l'organisme. Le dosage de la Ferritine sérique représente donc la méthode la plus simple et la moins invasive pour son évaluation. L'évolution des concentrations de Ferritine sérique <strong>ref</strong>lète les modifications de l'équilibre corporel dues à l'âge et au sexe. Pour des individus normaux, les niveaux moyens, légèrement plus élevés à la naissance, diminuent pendant l'enfance jusqu'à l'âge de la puberté. Ensuite chez les garçons, il y a une augmentation progressive des dépôts corporels de fer et proportionnellement de la ferritine sérique. Chez la femme en âge de procréer, on observe des valeurs plus basses et stables et une augmentation de la ferritinémie après la ménopause. Des valeurs de Ferritine inférieures à la norme indiquent, avec certitude, une carence en fer et elles permettent le diagnostic différentiel entre l'anémie suite à une carence en fer et l'anémie due à d'autres raisons. La surcharge martiale, due à l'augmentation de l'absorption de fer, comme dans le cas d'hémochromatose idiopathique ou de transfusions multiples, provoque une augmentation de la Ferritine sérique parfois bien supérieure aux valeurs normales. Une augmentation de la Ferritinémie se remarque aussi dans des conditions pathologiques comme: hépatopathies, processus infe<strong>ct</strong>ieux et inflammatoires, leucémie, lymphome de Hodgkin et d'autres formes néoplasiques. PRINCIPE DU TEST La présente méthode utilise deux anticorps monoclonaux anti-Ferritine qui reconnaissent deux épitopes différents de la molécule. Un anticorps est adsorbé sur une phase solide (tubes sensibilisés) l'autre, marqué a l'iode 125 est utilisé comme conjugué. L'échantillon à doser et l'anticorps marqué sont incubés simultanément dans le tube sensibilisé. De cette façon, l'anticorps marqué est lié à la phase solide par l'intermédiaire de l'antigène présent dans le calibrateur ou dans les échantillons en quantité dire<strong>ct</strong>ement proportionnelle à la concentration de ce dernier. Au terme de l'incubation, l'excès de réa<strong>ct</strong>if resté en solution est éliminé par aspiration et lavages. La radioa<strong>ct</strong>ivité résiduelle dans le tube est mesurée dans un compteur gamma. REACTIFS CONTENUS DANS LA TROUSSE: PREPARATION ET STABILITE − Les réa<strong>ct</strong>ifs sont suffisants pour réaliser 100 tests. − La trousse doit être stockée à 2-8°C. − La date de péremption est indiquée sur l'étiquette de chaque réa<strong>ct</strong>if. 1 - CT Tubes Sensibilisés: 100 tubes sensibilisés avec l'anticorps monoclonal anti-Ferritine (souris). Les tubes non utilisés doivent être conservés dans leur sachet soigneusement <strong>ref</strong>ermé à 2-8°C. 2 - CAL Calibrateurs: 7 flacons (1 mL) de Ferritine (foie humain) en tampon phosphate et BSA aux concentrations suivantes: 0, 5, 20, 50, 250, 1000 et 2000 ng/mL. Conservateur: NaN3 (< 0.1%). Prêt à l'emploi. La courbe de calibration a été calibrée sur le Standard International 94/572. N.B.: vérifier toujours l’exa<strong>ct</strong> concentration sur la feuille de C.Q. 3 - CONJ I 125 Conjugué Radioa<strong>ct</strong>if: 1 flacon (50 mL) d'anti-Ferritine monoclonal marqué à l'I 125 en tampon phosphate et BSA. Radioa<strong>ct</strong>ivité: 444 KBq. Conservateur: NaN3 (
6 - WASH Solution de Lavage (concentrée): 1 flacon (50 mL) de Tris-HCl et Tween 20. Conservateur: NaN3 (
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