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Estudio bacteriológico en granjas lecheras de traspatio del municipio de TarímbaroSG2-79 S. sonnei strain HDDMG06 (EU723822) 486/502 (96%)SG2-80 P. carotovorum strain Eca6 (EU490607) 473/476 (99%)SG2-81 P. carotovorum strain Eca6 (EU490607) 479/479 (100%)SG2-82 B. rubrifaciens strain 5950 (EU490604) 498/498 (100%)SG2-83 B. rubrifaciens strain 5950 (EU490604) 498/498 (100%)SG2-84 B. rubrifaciens strain 5950 (EU490604) 498/498 (100%)SG2-85 P. wasabiae strain WPP163 (EU490610) 431/432 (99%)(a) La primera letra de cada aislado designa el tipo de muestra de la cual se obtuvo: L, leche; H, heces; S,suelo.(b) Se presentan el nombre de los taxa como aparece en el Gen Bank. El número de acceso al Gen Bank estaentre paréntesis para todos los taxa. Los taxa designados como Uncultivated son clonas de secuenciasambientales de bacterias no cultivadas.(c) No. de bases idénticas/No. de bases comparadas, como los proporciona el análisis BLAST; entre paréntesisse muestran los porcentajes de identidad con relación al número de bases comparadas.La detección genético-molecularde enterobacterias se realizó tanto enADN obtenido directamente de excretasy suelo como en ADN de los aisladosbacterianos. En el ADN proveniente deheces el ensayo de PCR mostró una bandadel tamaño esperado (aprox. 544 pb)para todas las muestras de las granjas enestudio. En las muestras de ADN obtenidode suelo, sólo en una granja se observóuna banda de amplificación (Figura 1,panel superior). Estos resultados indicanque el ADN obtenido de suelo y heceses útil para la detección directa de enterobacteriasen este tipo de muestras, sinnecesidad de realizar aislamiento encultivo. Por otra parte, es posible que lasenterobacterias no sobrevivan muchotiempo en el suelo de las granjas, por loque en la mayoría de estas no se obtienenproductos de amplificación. En elcaso de ADN extraído de las coloniasbacterianas se observó una banda deltamaño esperado para los aislados provenientesde suelo y heces (Figura 1,panel inferior).Se secuenciaron los productos deamplificación obtenidos de los ensayosde PCR de los aislados bacterianos y serealizó una búsqueda en el GenBankmediante el algoritmo BLAST para encontrarlos taxa con máximia identidad.Al realizar esto con las muestras de lagranja 2 se encontraron identidades máximascon distintas especies de enterobacterias(Tabla 1), lo cual era de esperarsedebido al medio de cultivo empleadopara el aislamiento y los iniciadoresutilizados en el ensayo de PCR. Entodas las secuencias analizadas las identidadesencontradas fueron mayores al95% (Tabla 1). De los 41 aislados analizadosun 31.7% (13) presentaron máximaidentidad con secuencias deBrenneria rubrifaciens, 21.9% (9) conEscherichia coli y Pectobacteriumc a r o t o v o r u m , 9 . 7 % ( 4 ) c o nPectobacterium wasabiae, 4.8% (2) conShigella sonnei y 2.4% (1) con Klebsiellaoxytoca. Además, 7.3% (3) de las cepaspresentaron máxima identidad con clonasde secuencias provenientes de Escherichiasp. no cultivadas (Tabla 1).Al realizar un análisis de agrupamientode las secuencias obtenidas apartir de aislados bacterianos de la TablaNo. Especial 2008 Ciencia Nicolaita [123]