E - Coordinación de la Investigación Científica - Universidad ...

Gamaliel Valdivia Rojas, et al.!Figura 4. Obtención de callos embriogénicos resistentes ahigromicina. a) Semillas de arroz en MS con 2,4-D. b)Callos embriogénicos bombardeados a los 5 días. c) Calloembriogénico control teñido con x-gluc d) Callo bombardeadocon pCAMBIA1301 teñido con x-gluc. e) Callosembriogénicos en medio MS con higromicina 1 mes. f)Callo embriogénico a los 45 días de selección en higromicina.Ensayos de resistencia a higromicina encallos embriogénicos de arrozSe obtuvieron callos embriogénicosde arroz de 8 días, se sometieron adiferentes concentraciones de higromicina(0, 25, 50, 75 y 100 mg/L) y fueronco-cultivados cada dos semanas durantedos meses. En este ensayo se encontróque a una concentración de 50 mg/L dehigromicina los callos se morían de unamanera eficiente y uniforme; en concentracionesmenores, los callos todavía presentabancrecimiento y a concentracionesmayores los callos presentaban unamuerte rápida y presentaban un aspectomucilaginoso (Figura 3).Ensayos de resistencia a higromicina yde expresión transitoria de uidA, encallos embriogénicos bombardeados conel vector pCAMBIA1301Se bombardearon callos embriogénicosderivados de semillas de arrozcon el vector pCAMBIA1301, el cualcontenía el gen de resistencia a higromicinay el gen uidA (GUS). Los lotes bombardeadosfueron sometidos a seleccióncon higromicina 50 mg/L en medio MSco-cultivándolos cada 15 días durantemes y medio (Figura 4). En este ensayo seobservó que a las 36 h del bombardeolos callos presentaron buena expresióntransitoria y que un tiempo de 1.5 mesesen medio de selección con higromicinafue suficiente para poder obtener callosresistentes y a partir de éstos se harán laregeneración para obtener plantas transformadas.BibliografíaCabrera-Ponce, J.L. 2001. Desarrollo deun método para la transformacióngenética del maíz (Zea mays L.) deinterés agronómico mediante la ingenieríagenética. Tesis de doctorado.Universidad de Colima. ColimaMéxico. 142 pp.Curatti, L., Folco, .E, Desplants, P.,Abratti, G., Limones, V., Herrera-Estrella, L. y Salerno, G. 1998.Sucrose-Phosphate Synthase fromSynechocystis sp. strain PCC 6803:Identification of the spsA gene andcharacterization of the enzyme expressedin Escherichia coli. The journalof Bacteriology, 180:6776-6779.FAO. 2003. Documento base del añointernacional del arroz. FAO.http://www.fao.org/rice2004/es/f-shee[64] Ciencia Nicolaita No. Especial 2008