E - Coordinación de la Investigación Científica - Universidad ...

Javier Oviedo Boyso, et al.cial importancia, ya que provocan pérdidaseconómicas considerables (Dego etal., 2002). Aunque S. aureus se ha consideradouna bacteria extracelular, se hanobtenido evidencias de que puede internalizarseen varios tipos celulares comolas células endoteliales de bovino (CEB)(Hamill et al., 1986). Resultados obtenidosen el laboratorio por Oviedo-Boysoet al. (2008), demostraron que la capacidadde las CEB para fagocitar a S. aureusaumentó por estimulación con TNF- e IL-1 y está asociada al estado de activacióndel factor de transcripción factor nuclearB (NF-B).S. aureus tiene una variedad defactores de virulencia y componentes depared que contribuyen a las característicaspatogénicas de la bacteria. Entre estosfactores se encuentra la proteína A, lacual es una molécula de superficie quetiene un efecto antifagocítico por su capacidadde unirse a la región Fc de lainmunogloblina G (IgG) (Fournier y Philpott,2005). Además, la proteína A seune al receptor 1 de TNF- (TNFR1) ubicadoen células epiteliales de pulmón, locual causa la activación de varias vías deseñalización, entre ellas la asociada conNF-B (Gómez et al., 2004; Gómez et al.,2006). Considerando que TNF- aumentala internalización de S. aureus en lasCEB mediante la activación de TNFR1 yque la proteína A se une al mismo receptorque esta citocina, en este trabajo seinvestigó el efecto de la proteína A sobrela internalización de S. aureus en lasCEB.Materiales y MétodosSe utilizaron células endotelialesde cordón umbilical de bovino inmortalizadas(Cajero-Juárez et al., 2002) y unacepa de S. aureus subespecie aureus deATCC (27543). TNF-, IL-1 (RD Systems.Mineapolis, MN, USA), lisostafina,proteína A (Sigma-Aldrich, Inc. St Louis,MO, USA). Los medios y las condicionespara el cultivo de las células endotelialesy la preparación del inóculo de S. aureusestán descritos en Oviedo-Boyso et al.(2008).Tratamiento de las CEB con proteína A.Las CEB se trataron con 0 a 15 μg/ml de proteína A durante 4 h, o bien con5 μg/ml durante 0 a 240 min. Despuésde lavar las células con buffer salino defosfatos (PBS), las CEB se infectaron con1 x 10 6 unidades formadoras de colonia(UFC)/ml de S. aureus durante 20 min.Las bacterias no internalizadas se eliminaronpor tratamiento con 5 μg/ml delisostafina durante 20 min. La recuperaciónde la capacidad fagocítica de lasCEB se evaluó incubando las células con5 μg/ml de proteína A por 1 h, para despuésinfectarlas con 1 x 10 6 UFC/ml deS. aureus durante 20 min en los tiemposde 0, 2 y 6 h de cultivo (periodo decultivo, PC). Para observar si TNF o IL-1inducían una recuperación de la capacidadfagocítica de las CEB, las células setrataron con 5 μg/ml de proteína A por 1h. Después de un PC de 2 h, las CEB seincubaron con 3 ng/ml de TNF- ó 20 ng/ml de IL-1 durante 4 h y se infectaron enlas condiciones antes mencionadas. Entodos los casos, las bacterias intracelularesrecuperadas se cultivaron y las UFCse contaron de acuerdo con el procedimientodescrito anteriormente por Oviedo-Boysoet al. (2008).Análisis estadísticoPara normalizar los datos, el númerode UFC/ml se dividió entre el nú-[156] Ciencia Nicolaita No. Especial 2008