Ciencia Nico<strong>la</strong>ita, No. Especial, 2008: 53-58<strong>Universidad</strong> Michoacana <strong>de</strong> San Nicolás <strong>de</strong> HidalgoDiversidad <strong>de</strong> los hongos micorrízicosarbuscu<strong>la</strong>res asociados a p<strong>la</strong>ntas <strong>de</strong> aguacate(Persea americana Mill.), en un agroecosistema <strong>de</strong>lEstado <strong>de</strong> MichoacánNuria Gómez Dorantes 1 , Miguel Martínez Trujillo 2* y Yazmín Carreón Abud 2**1Programa <strong>de</strong> Maestría Institucional en Ciencias Biológicas. e-mail: nuriah@live.com.mx. 2 F acultad <strong>de</strong> Biología.Laboratorio <strong>de</strong> Genética y Microbiología. *E-mail: codigogenetico@gmail.com; **E-mail: ycabud@yahoo.com.mx.<strong>Universidad</strong> Michoacana <strong>de</strong> San Nicolás <strong>de</strong> HidalgoResumenEl presente trabajo tiene como objetivo principal i<strong>de</strong>ntificar los principalesgéneros y posibles especies <strong>de</strong> Hongos Micorrízicos Arbuscu<strong>la</strong>res (HMA) asociados araíces <strong>de</strong> p<strong>la</strong>ntas <strong>de</strong> aguacate, mediante el análisis <strong>de</strong> <strong>la</strong>s secuencias <strong>de</strong> ADNribosomal y corre<strong>la</strong>cionarlos con los HMA presentes en el suelo como esporas. Laextracción y purificación <strong>de</strong> ADN genómico se realizó mediante el protocoloindicado por el Mini Kit DNeasy (Qiagen). Para <strong>la</strong> evaluación <strong>de</strong>l ADN obtenido apartir <strong>de</strong> raíces se hará uso <strong>de</strong> <strong>la</strong> técnica <strong>de</strong> PCR utilizando los primers universalespara eucariontes (NS1-ITS4) que permitan inicialmente <strong>la</strong> amplificación <strong>de</strong>l gen <strong>de</strong> <strong>la</strong>subunidad ribosomal 18S, y posteriormente mediante oligonucleótidos específicos(VAGIGA, VAGLO, VAACAU en combinación con NS31, amplificar secuenciasespecíficas <strong>de</strong> HMA (PCR anidada), que permitan <strong>la</strong> i<strong>de</strong>ntificación <strong>de</strong> los diferentesgéneros y posibles especies <strong>de</strong> HMA, que colonizan <strong>la</strong> raíz. Los productosamplificados <strong>de</strong> <strong>la</strong> PCR anidada se purificarán y ligarán en el vector pGEM-T-easy(Promega). Todas <strong>la</strong>s construcciones serán verificadas por secuenciación con losoligonucleótidos universal y reverso El alineamiento <strong>de</strong> secuencias se realizarámediante el programa BioEdit (Hall, 1999). Las secuencias generadas en este trabajoserán comparadas con <strong>la</strong>s especies registradas en el BEG (La Banque Européenne<strong>de</strong>s Glomales) y en el NCBI. Mediante el análisis morfológico se ha encontrado quelos géneros Glomus y Acaulospora fueron los más abundantes en el suelo. Mediante<strong>la</strong>s tinciones <strong>de</strong> raíz, se encontraron elevados porcentajes <strong>de</strong> colonizaciónmicorrícica (<strong>de</strong> 80% a 100%), lo que indico que el aguacate es una p<strong>la</strong>nta altamentecolonizada por este grupo <strong>de</strong> hongos.IntroducciónLa micorriza arbuscu<strong>la</strong>r (MA) esuna asociación benéfica establecida entre<strong>la</strong> mayoría <strong>de</strong> <strong>la</strong>s p<strong>la</strong>ntas superiores<strong>de</strong>scritas (>85%) con hongos <strong>de</strong>lPhyllum Glomeromycota (Schüßler et al.,2001). De manera natural, <strong>la</strong> micorrizase encuentra asociada en los hábitatsdon<strong>de</strong> el aguacate es nativo. Por los be-Ciencia Nico<strong>la</strong>ita No. Especial, 2008, Programa Institucional <strong>de</strong>Maestria en Ciencias Biologicas
Nuria Gómez Dorantes, et al.neficios propios <strong>de</strong> esta asociación simbióticamutualista (hongo-p<strong>la</strong>nta) en losúltimos años se han realizado investigacionespara <strong>de</strong>terminar el efecto <strong>de</strong>ais<strong>la</strong>mientos <strong>de</strong> hongos MA sobre sistemas<strong>de</strong> producción agríco<strong>la</strong>, con el fin<strong>de</strong> lograr sistemas <strong>de</strong> producción sosteniblesy competitivos (Azcón-Agui<strong>la</strong>r etal., 1992).El estudio <strong>de</strong> <strong>la</strong> diversidad <strong>de</strong> losHMA se ha visto limitado principalmentepor su biotrofía obligada y por <strong>la</strong> imposibilidad<strong>de</strong> reproducirlos y estudiarlosen ausencia <strong>de</strong> <strong>la</strong> p<strong>la</strong>nta (Souza et al.,2004). Aún cuando los HMA no sonhospe<strong>de</strong>ros específicos se ha visto quemuestran afinida<strong>de</strong>s con ciertas familias<strong>de</strong> p<strong>la</strong>ntas, esto <strong>de</strong>bido a que son organismosmuy diversos. Morton y Benny(1990) mencionan que se conocen pocomás <strong>de</strong> 150 especies pertenecientes aseis géneros <strong>de</strong>l or<strong>de</strong>n Glomerales queforman asociación micorrízica con <strong>la</strong>sp<strong>la</strong>ntas. Estudios recientes basados en e<strong>la</strong>nálisis <strong>de</strong> 18S ADNr, han <strong>de</strong>mostrado <strong>la</strong>naturaleza monofilética <strong>de</strong> este grupo <strong>de</strong>hongos, lo que ha permitido incluirlos enun nuevo Phyllum <strong>de</strong>nominado Glomeromycota(Schüβler et al., 2001).La i<strong>de</strong>ntificación <strong>de</strong> <strong>la</strong>s especies<strong>de</strong> HMA se basa en <strong>la</strong>s característicasmorfológicas <strong>de</strong> esporas asexuales remanentesen el suelo, siendo el tamaño,color, hifa <strong>de</strong> sostén, ornamentación yestructuras <strong>de</strong> <strong>la</strong> pared, los principalescriterios usados para <strong>la</strong> <strong>de</strong>limitación <strong>de</strong>especies (Bago et al., 2000). Sin embargo,esta i<strong>de</strong>ntificación no es muy confiable<strong>de</strong>bido que se ha visto que numerosasespecies llegan a estar presentes en elsuelo sin esporu<strong>la</strong>r, o bien presentan periodoserráticos <strong>de</strong> esporu<strong>la</strong>ción.La biología molecu<strong>la</strong>r ofrece variasherramientas para solucionar losinconvenientes que genera el estudiomorfológico-<strong>de</strong>scriptivo <strong>de</strong> los HMA,entre éstas <strong>de</strong>staca <strong>la</strong> técnica <strong>de</strong> reacciónen ca<strong>de</strong>na <strong>de</strong> <strong>la</strong> polimerasa (PCR, porsus sig<strong>la</strong>s en inglés) que permite i<strong>de</strong>ntificarestos microorganismos <strong>de</strong> manerafácil y eficaz (Rodríguez et al., 2004).Los genes ribosomales se hanconvertido en los materiales más ampliamenteutilizados para <strong>la</strong> <strong>de</strong>terminación<strong>de</strong> <strong>la</strong> diversidad <strong>de</strong> los HMA en losecosistemas (Souza et al., 2004). Para elcaso particu<strong>la</strong>r <strong>de</strong> los HMA, Simón et al.(1993) aplicaron técnicas <strong>de</strong> PCR alestudio <strong>de</strong> genes nucleares codificantes<strong>de</strong> <strong>la</strong> subunidad 18S rDNA, diseñando elprimer oligonucleótido “específico” <strong>de</strong>los Glomerales, capaz <strong>de</strong> amplificarADN fúngico en raíces colonizadas poreste tipo <strong>de</strong> hongos.El gen ribosomal 18S es <strong>la</strong> región<strong>de</strong>l genoma <strong>de</strong> los Glomeromycota(hongos formadores <strong>de</strong> MA) más secuenciadapara estudios <strong>de</strong> filogenia (Simónet al., 1993). Los datos filogenéticos obtenidos<strong>de</strong> <strong>la</strong>s secuencias <strong>de</strong>l ADNr 18S<strong>de</strong> diferentes hongos se han usado parafechar su origen entre 353 a 462 millones<strong>de</strong> años (Simón et al., 1993) lo quecorrespon<strong>de</strong> al periodo en que <strong>la</strong>s p<strong>la</strong>ntasprimitivas colonizaron los continentes.González (2005) realizó previamenteun análisis <strong>de</strong> <strong>la</strong> diversidad <strong>de</strong> losHMA presentes en el suelo <strong>de</strong>l agroecosistema<strong>de</strong> aguacate, objeto <strong>de</strong>l presenteestudio; usó so<strong>la</strong>mente criterios morfológico-<strong>de</strong>scriptivospara <strong>de</strong>terminar cadauna <strong>de</strong> <strong>la</strong>s especies. Sin embargo, es unestudio que no reflejo con precisión a <strong>la</strong>sespecies que colonizan <strong>la</strong>s raíces <strong>de</strong>aguacate.El presente trabajo tiene comoobjetivo probar que los hongos micorrí-[54] Ciencia Nico<strong>la</strong>ita No. Especial 2008
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