E - Coordinación de la Investigación Científica - Universidad ...

Sandra Gabriela Barbosa Muñoz, et al.un gran número de análogos (Baker etal., 2004; Bal, 2000). Dentro de lasFluoroquinolonas (FQ) de segunda generaciónel ciprofloxacino y ofloxacino,han sido las más utilizadas en la terapéutica(Baker et al., 2004; Mitseher,2005).Las FQ ejercen su acción antibacterianatras penetrar en el citoplasmamediante un mecanismo de difusión pasivaa través de los canales acuosostransmembrana de las porinas, o de lacapa de los lipopolisacáridos. Una vezdentro de la célula, actúan por mecanismosque son complejos y no del todoconocidos (Taléns, 2001).El blanco de acción molecular delas FQ son las topoisomerasas bacterianastipo II, enzimas encargadas de resolverproblemas topológicos en el DNAcon ayuda de ATP. Generalmente laDNA girasa es el blanco en bacteriasgram negativas (Noble et al., 2003; Holden,2001).La DNA girasa se encarga de inducirun superenrrollamiento negativoen el DNA necesario para que éste seempaquete dentro de la célula, manteniendoun nivel de enrrollamiento delADN que facilite el movimiento hacialos complejos que se forman en la replicacióny la transcripción (Anderson etal., 1998; Alós, 2003; Herrera et al.,2004).Las FQ ejercen su efecto bactericidainvolucrándose en el complejoADN-Topoisomerasa formando uncomplejo ternario Quninolona-DNA-Topoel cual se vuelve un veneno para lacélula y provoca la muerte celular bacteriana(Wilsonm, 1998; Elsea et al.,1992). Sin embargo, los detalles molecularesde cómo las quinolonas interfierencon la acción de la topoisomerasas ocon el complejo DNA-Topo no estáncompletamente claros (Tuma et al.,2002; Kampranis y Maxwell, 1998;Siegmund et al., 2005).En el grupo de investigación sehan descrito algunos complejos de ciprofloxacino-Bi(III)y Ofloxacino-Bi(III)que, preparados bajo condiciones alcalinasa diferencia de los descritos en condicionesácidas, han resultado ser másactivos con respecto a las quinolonas deque derivan, así mismo se ha demostradosu capacidad de interacción con elDNA. Por su parte, estudios de relaciónestructura actividad y otros datos experimentaleshan dejado claro que el Bi(III)no es el responsable per se de la actividadsino el complejo como tal. Se hanrealizado estudios sobre cepas resistentesa ciprofloxacino, las cuales mostraronresistencia a los complejos Quinolona-Bi(III) sin haber tenido previo contactocon éstos compuestos indicando que elmecanismo de acción molecular pudieseser similar, es decir, a través de la inhibiciónde la girasa bacteriana. Pese a todoslos datos obtenidos hasta el momento,este punto no se ha resuelto de maneracontundente. En el presente trabajo sepretende elucidar de manera definitivael papel de la girasa en el mecanismo deacción de los complejos mencionados.Material y MétodosExtracción de OfloxacinoSe trituró una tableta comercial deOfloxacino de 200 mg (laboratoriosJANSSEN – CILAG) y se molió hasta obtenerun polvo fino el cual se colocó enun matraz bola. Se agregaron 10 mL decloruro de metileno y 10 mL de aguadestilada y la mezcla se agitó durante 1h. Se separaron las fases en un embudo[34] Ciencia Nicolaita No. Especial 2008