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Rev peru med exp salud publica 20 (4), 2003Moreno L. y col.Este método puede ser aplicado a los análisis de muestrasde pacientes intoxicados con hidrato de cloral otricloroetileno, además puede ser aplicable a estudiosfarmacocinéticos en humanos.Los resultados obtenidos muestran una diferencia significativaen los niveles de tricloroetanol en los grupos sin insuficienciahepática y con insuficiencia hepática, lo cual puede debersea un mejor metabolismo en el primer grupo de animales.El período de latencia, duración del efecto e intensidad elpromedio de duración del efecto de hidrato de cloral fueligeramente superior en el grupo sin insuficiencia hepáticacon respecto al grupo con insuficiencia hepática. Laintensidad moderada del efecto fue similar en ambosgrupos. El promedio del período de latencia fue más cortoen el grupo sin insuficiencia hepática frente al grupo coninsuficiencia hepática. Entonces podemos afirmar que enel grupo sin insuficiencia hepática el metabolismo delhidrato de cloral es el más óptimo y rápido.El tetracloruro de carbono (TCC) provoca daño al hígadodesde un simple cambio graso a cirrosis. La manifestaciónmás temprana y común es un cambio graso macrovesicularreversible. El cambio más importante es el esteatohepatitisno alcohólica (NASH). El tetracloruro de carbono provocauna esteatosis, acumulación de grasa, que tiendeprincipalmente a ser centrilobular, en oposición a unalocalización periportal en proceso como cirrosis biliarprimaria u obstrucción biliar. El predomino central ocentrilobular del daño hepatocelular con tricloroetanol puedeoriginar una fibrosis centrilobular, y finalmente una cirrosis 18 .Se demostró insuficiencia hepática en las ratas aladministrárseles tetracloruro de carbono por vía intraperitonealdurante 3 días evidenciado por un perfil hepático alterado ypor lesiones histológicas. Se observó que existe diferenciaen el metabolismo del hidrato de cloral en las ratas con y sininsuficiencia hepática, notándose mayores niveles séricos detricloroetanol - metabolito activo del hidrato de cloral - en lasratas normales. Los períodos de latencia más cortos y laduración del efecto más prolongado son característicos delas ratas normales. La intensidad del efecto fue la misma enlas ratas con y sin insuficiencia hepática.REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS1. United States Pharmacopeia Dispensing Information (USPDI). Drug information for the health care professional Vol. 1.13th ed. Englewood (US): Micromedex, Inc; 1993.2. Steinberg AD. Should chloral hydrate be banned? Pediatrics1993; 92(3): 442-63. Malis DJ, Burton DM. Safe pediatric outpatient sedation: thechloral hydrate debate revisited. Otolaryngol Head Neck Surg1997; 116 (1): 53-74. Mc Carver-May DG, Kang J, Aouthmany A, Elton RE,Mowery JL, Slovis TL, et al. Comparison of Chloral hydrateand midazolam for sedation of neonates for neuroimagingstudies. J Pediatr 1996; 128(4): 573-6.5. United States Pharmacopeia Dispensing Information (USPDI). Approved drug products and legal requirements Vol. 3.19th ed. Englewood (US): Micromedex, Inc; 2000.6. American Academy of Pediatrics Committee on Drugs andCommittee on Environmental Health. Use of chloral hydratefor sedation in children. Pediatrics 1993; 92(3): 471-37. Working Group European Associations on Animal Healthin the Laboratory. Blood extraction in mammals and birds inthe laboratory. United Kingdom: FELASA; 1995.8. Lynch MJ, Rápale SS, Mellor LD, Spare PD, Inwood MJH.Métodos de laboratorio. 3a ed. México, D.F: Interamericana;1991.9. Bishop M, Duben-von Laufen J, Fody E. Clinical chemistry:principles, procedures, correlations. Philadelphia: J.BLippincott Co; 1985.10. Bauer J. Clinical laboratory methods. Saint Louis: Mosby Co;1982.11. Doumas BT, Watson WA, Biggs HG. 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Verschoyle R, Carthew P, Wolf C, Dindsdale D. 1-Nitronaphthalene toxicity in rat lung and liver: effects ofinhibiting and inducing cytochrome P450 activity. Toxicol ApplPharmacol 1993; 122(2): 208-13.20. Maezono K, Mawatari K, Kajiwara K, Shinkai A, Maki T.Effect of alanine on D-galactosamine - induced acute liverfailure in rats. Hepatology 1996; 24(5): 1211-6.21. Valentovic MA, Lo H, Brown P, Rankin G. 3,5-Dichloroanilinetoxicity in Fischer 344 rats pretreated with Inhibitors andinducers of Cytochrome P450. Toxicol Lett 1995; 78(3): 207-14.22. Valentovic MA, Ball JG, Anestis D, Madan E. Modificationof p450 activity and its effect on 1,2 - dichlorobenzene toxicityin Fischer 344 rats. Toxicology 1993; 24; 79(3): 169-80.23. Ogata M, Saeki T. Measurement of chloral hydrate,trichloroethanol, trichloroacetic acid and monochloroaceticacid in the serum and the urine by gas chromatography. IntArch Arbeitsmed 1974; 33(1): 49-58.24. Breimer DD, Ketelaars HCJ, van Rossum JM. 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Rev peru med exp salud publica 20 (4), 2003EVALUACIÓN SEROLÓGICA DE UNA PROTEÍNA RECOMBINANTE APARTIR DE UNA CEPA AISLADA DEL VIRUS DE LA FIEBRE AMARILLAEN EL PERÚ: UN ESTUDIO PILOTOCarlos Yábar V 1 , Juana Choque P 1 , Ysabel Montoya P 2RESUMENObjetivo: Evaluar serológicamente una proteína recombinante de 66 kDa (Er66) de una cepa del virus de la fiebre amarillaaislada en el Perú usando anticuerpos inmunoreactivos. Material y métodos: La proteína Er66 fue expresada in vitro en labacteria Escherichia coli y enfrentada a títulos de 1/100, 1/50 y 1/25 de anticuerpos monoclonales, y a sueros con anticuerposIgM e IgG inmunoreactivos contra el virus de la fiebre amarilla mediante ensayos de Western blot (WB). Asimismo, seevaluaron proteínas totales de las cepas de referencia del virus dengue (DEN) y fiebre amarilla como controles de antigenicidad.Resultados: La proteína recombinante Er66 presentó antigenicidad contra títulos de 1/50 y 1/25 de anticuerpo monoclonal(MAB8701); sin embargo, no se observó inmunoreactividad en sueros positivos para fiebre amarilla y dengue. Los ensayoscon extractos crudos de la cepa de fiebre amarilla Asibi 17D (PTFA) revelaron que la antigenicidad de las proteínas viralescomprendidas entre 60 y 80 kDa fue afectada negativamente a temperaturas desnaturalizantes de 100°C. En cambio,tratamientos con ß-mercaptoetanol sin calor generó un aumento de la antigenicidad de dichas proteínas. Siguiendo estemismo principio, la proteína Er66 fue sometida a tratamientos desnaturalizantes con ß-mercaptoetanol sin incluir calor y fueenfrentada nuevamente a los sueros reactivos. El resultado final reveló que la proteína Er66 generó inmunoreactividad frentea sueros con altos títulos de anticuerpos IgM e IgG para fiebre amarilla mientras que en otras muestras se observó una débilseñal. Conclusiones: Los datos obtenidos en este trabajo demuestran que la Er66 pudo ser reconocida por anticuerpos IgMe IgG específicos para fiebre amarilla presentes en sueros de pacientes infectados. Los datos presentados en este artículosugieren el uso de proteínas recombinantes como posibles candidatas de valor diagnóstico para la FA.Palabras clave: Virus de la fiebre amarilla; Serología; Proteínas Recombinantes; Anticuerpos Monoclonales; Perú (fuente:BIREME)␣ABSTRACTObjective: To assess a 66kDa (Er66) recombinant protein of yellow fever (YF) virus using immunoreactive antibodies.Material and methods: Er66 was expressed in Escherichia coli and then it was challenged against 1/100, 1/50 and 1/25monoclonal antibodies containing dilutions, and against clinical sera containing specific IgM and IgG antibodies againstYF virus using western blot assay. Likewise, total protein content from yellow fever virus and Dengue (DEN) virus were alsotested as antigenicity control. Results: Er66 recombinant protein showed antigenicity against 1/50 and 1/25 titers ofmonoclonal antibodies (MAB8701); however, no immunoreactivity was observed in sera positive for yellow fever anddengue infections. Serological assays with crude extracts of 17D Asibi yellow fever virus strain revealed that antigenicity of60 – 80 kDa viral proteins was abrogated at 100 °C (denaturizing temperature). In contrast, when total protein was subjectedto b-mercaptoethanol treatments without heat, the antigenicity increased. Using this principle, ER66 protein was reducedunder b-mercaptoethanol treatment and it was newly challenged to reactive sera. The final result revealed that Er66generated immunoreactivity in sera with high titers of IgM and IgG antibodies for yellow fever, while other samples showeda weak immunoreactivity signal. Conclusion: This study shows that Er66 was recognized by specific IgM and IgG yellowfever antibodies from clinical samples of infected patients. The data presented in this study suggest the use of recombinantproteins as possible candidates with a diagnostic value for yellow fever.Key words: Yellow fever virus; Serology; Recombinant Proteins;␣ Monoclonal Antibodies; Peru (source: BIREME)INTRODUCCIÓNLa fiebre amarilla (FA) es una enfermedad febrilhemorrágica de origen viral transmitida al hombre a travésde la picadura de mosquitos vectores de los génerosAedes, Sabethes o Haemagogus 1 .El agente causal es un virus de ARN que presenta ungenoma de aproximadamente 11 Kb, el cual codifica 10proteínas diferentes 2 . Las tres primeras proteínasconocidas como C, M y E son de tipo estructural y forman1División de Biología Molecular. Centro Nacional de Salud Pública.Instituto Nacional de Salud. Lima, Perú.2Instituto Peruano de Energía Nuclear. Lima, Perú.parte de la envoltura y la cápside del virus. Las siete últimas,son de tipo no estructural y están involucradas en procesosde ensamblaje, maduración y replicación del virus 3, 4,5 .Con respecto a la proteína de la envoltura (E) del virus sehan reportado distintos pesos moleculares que bordeanentre 49 KDa 6, 7 , 54 KDa 8, 9 y 65 KDa 10 . Estos tamañospodrían deberse al número variable de glicosilaciones entreaislamientos de diferentes regiones, y al grado demaduración de la proteína durante el ensamblaje del virus 8 .De otro lado, es importante señalar que la proteína E es laprimera proteína viral reconocida por los anticuerpos delhospedero durante la primera etapa de la infección viral 11 .193
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