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Rev peru med exp salud publica 20 (4), 2003METABOLISMO DE HIDRATO DE CLORAL EN RATAS CONINSUFICIENCIA HEPÁTICA INDUCIDA PORTETRACLORURO DE CARBONOLuis Moreno E 1 , Andrés Herrera C 2 , Luz Oyola de Bardales 3 , Jorge Arroyo A 4 , Liliana Marrufo S 5RESUMENObjetivo: Determinar el metabolismo del hidrato de cloral en ratas bajo condiciones normales y en ratas con insuficienciahepática inducida con tetracloruro de carbono. Material y métodos: Se usaron ratas macho de la cepa Holtzman. Elproceso de inducción de la insuficiencia hepática se realizó durante 3 días consecutivos; este efecto fue confirmado através de cortes histológicos del hígado, administrándose luego hidrato de cloral por vía oral en ambos grupos.Posteriormente, se realizó el dosaje en plasma de tricloroetanol - metabolito activo del hidrato de cloral - por el método decromatografía gaseosa con un detector de ionización de llama, realizándose la validación de dicho método. Resultados:Se encontró una diferencia significativa en la cantidad de tricloroetanol entre los grupos con y sin insuficiencia hepática.Se reporta los períodos de latencia, duración e intensidad del efecto del hidrato de cloral, en todos los grupos en estudio.Conclusiones: El metabolismo del hidrato de cloral se encuentra alterado en los grupos con insuficiencia hepática, elnivel de alteración del metabolismo puede ser cuantificado a través del dosaje de tricloroetanol, el cual fue realizadooptimizando un método existente.Palabras clave: Hidrato de Cloral/metabolismo; Insuficiencia Hepática; Cromatografía de Gases; Ratas. (fuente: BIREME)ABSTRACTObjective: To determine the metabolism of chloral hydrate in normal rats and in rats with carbon tetrachloride-inducedhepatic impairment. Material and methods: Holtzman male rats were used; the process for hepatic impairment inductionwas performed for three consecutive days, and this condition was confirmed through histological examination of liversamples. After the aforementioned procedure, chloral hydrate was administered orally to both groups. Then, plasmatrichloroethanol – an active metabolite of chloral hydrate - was determined using gas chromatography with a flame ionizationdetector, and this method was validated. Results: There was a significant difference on plasma levels of trichloroethanolin rats with and without hepatic impairment. Latency period, duration and intensity of chloral hydrate effects were recordedin both groups studied. Conclusions: Chloral hydrate metabolism is altered in rats with hepatic impairment; and the levelof hepatic impairment may be quantified through thichloroetanol determination, a procedure performed optimizing anavailable method.Key words: Chloral hydrate/metabolism; Liver Failure; Gas Chromatography; Rats. (source: BIREME)INTRODUCCIÓNEl hidrato de cloral es un sedante hipnótico nobarbitúrico, no benzodiazepínico, que es absorbidorápidamente en el tracto gastrointestinal, en el hígado y enlos eritrocitos se convierte en metabolito activo tricloroetanol,el cual puede ser convertido a metabolitos inactivos.También es metabolizado directamente a metabolitos1División de Química, Centro Nacional de Control de Calidad,Instituto Nacional de Salud. Lima, Perú.2División de Microbiología, Centro Nacional de Control de Calidad,Instituto Nacional de Salud. Lima, Perú.3Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad Nacional Mayorde San Marcos. Lima, Perú.4Facultad de Medicina, Universidad Nacional Mayor de SanMarcos. Lima, Perú.5Laboratorio de Cromatografía, Dirección General de SaludAmbiental. Lima, Perú.inactivos. El inicio de la acción cuando su administraciónes por vía oral se presenta a los 30 minutos, y duraaproximadamente entre 4 y 8 h. Su eliminación esprincipalmente a través de la vía renal aproximadamente40% de la dosis se excreta en 24 h. La vida media delmetabolito activo, tricloroetanol, es entre 7 y 10 h.Aproximadamente, entre 35 y 41% se une a las proteínasplasmáticas 1 .En la presente investigación se ha estudiado el hidrato decloral, medicamento utilizado principalmente en lapoblación pediátrica como adyuvante de la anestesia ysedante hipnótico para ciertos procedimientos médicos ydentales. A pesar de las preocupaciones de la seguridaden el uso del hidrato de cloral, este sigue siendo usado enla población pediátrica. Recientemente se intentó desplazaral hidrato de cloral por el uso de benzodiazepinas186
Rev peru med exp salud publica 20 (4), 2003Metabolismo de hidrato de cloral en ratas(midazolam, diazepam, triazolam, temazepan, lorazepan),de ellas el midazolam es la de mayor uso; sin embargo, seha demostrado que las benzodiazepinas no son grandesagentes hipnóticos en la población pediátrica 2-4 . La dosispediátrica usual, como sedante hipnótico, es entre 30 y 50mg/kg/peso hasta un máximo de 1 g como dosis única 5,6 .La razón de utilizar ratas con insuficiencia hepática es porqueuna de las contraindicaciones para el uso de estemedicamento es el daño hepático severo. Con el presentetrabajo se pretende obtener datos que ayuden a un mejorconocimiento y manejo de este medicamento, permitiendorealizar un dosaje en fluidos biológicos del metabolito activo,tricloroetanol, en el caso de una sobredosis por hidrato decloral. El objetivo fue evaluar su metabolismo en ratas bajocondiciones normales y con insuficiencia hepática.MATERIAL Y MÉTODOSEs un estudio experimental, controlado.ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓNSe usaron 56 ratas macho de 12 semanas de edad de la cepaHoltzman provenientes del Centro Nacional de Producción deBiológicos, todos los animales de cada grupo pertenecieron ala misma camada, con un peso promedio de 250 g.Estas ratas fueron colocadas en jaulas individuales conuna temperatura ambiental controlada que osciló entre16°C y 21°C. El alimento basado en torta de soyaproveniente de la Universidad Agraria La Molina y agua adiscreción de los animales (ad libitum).REACTIVOS QUÍMICOSHidrato de cloral (100%) (Carlo Erba), tricloroetanol (99%)(Aldrich), 2,2 dicloroetanol (99%) (Aldrich), acetona(Merck), eter dietílico (Merck), tetracloruro de carbono(Merck), ketamina (Abbott), kit de diagnóstico detransaminasas (Diagno Test), kit de diagnóstico deproteínas totales (Wiener Lab.), kit de diagnóstico debilirrubina (Wiener Lab.), kit de diagnóstico de fosfatasaalcalina (Diagno Test).EQUIPOSSe usó un cromatógrafo de gases Hewlett-Packard modelo5890, equipado con un detector de ionización de llama (FID),una columna Carbowax 30 m x 250mm, un integrador HP3398A y un espectrofotómetro Spectronic 20D.DISEÑO EXPERIMENTALSe formaron 4 grupos, bajo el esquema de trabajo que semuestra en la tabla 1.Tabla 1. Grupos de trabajo del diseño experimental.Grupo Tratamiento Nº Ratas Período de latencia/ duración/ Hidrato de cloralintensidad del efecto1 Control sin insuficiencia hepática 8 —- Suero fisiológico2 Control con insuficiencia hepática 8 —- No recibió3 Con insuficiencia hepática más hidrato de cloral 8 X Recibió4 Sin insuficiencia hepática más hidrato de cloral 8 X RecibióTotal 32Determinación de enzimas hepáticas y proteínas totalesEn el grupo 1 se aplicó suero fisiológico (0,8 mL/kg/peso)por 3 días consecutivos. En los grupos 2 y 3 se indujo unainsuficiencia hepática inyectándose por vía intraperitonealtetracloruro de carbono (0,8 mL/kg/peso) durante 3 díasconsecutivos. En el cuarto día, a los grupos 3 y 4 se lesadministró por vía oral 50 mg/kg/peso de hidrato de cloralen solución 1 . Ese mismo día y luego de 1 h de haberadministrado el hidrato de cloral a los grupos 3 y 4; a todoslos grupos se les aplicaron ketamina (45mg/kg/peso) víaIM, luego se les extrajo sangre por punción cardíaca 7 , lasangre fue colectada en tubos heparinizados y centrifugadaa 3 000 g 8 . El plasma obtenido de los grupos 1 y 2 fue usadopara realizar el perfil hepático que incluyeron las siguientespruebas: Transaminasas (GOT/GPT) (Método enzimático con2,4 dinitrofenilhidrazina) 9 , fosfatasa alcalina (Métodoenzimático con p-nitrofenil fosfato) 10 , proteínas totales(Método colorimétrico con EDTA/cobre) 11 y bilirrubina(Método colorimétrico con ácido sulfanílico/diazotado) 12 .Cortes histológicosUna vez realizado el perfil hepático, se sacrificaron a losanimales del grupo 1 y 2 por el método de desnucamiento,se les extrajo el hígado y se realizaron cortes histológicosde los hígados con y sin insuficiencia hepática. Para suestudio se usó la tinción de hematoxilina-eosina.Determinación de tricloroetanol-metabolito activo-(Modificado por Humbert, 1994) 13El plasma obtenido de los grupos 3 y 4 se usó para el dosajedel metabolito activo tricloroetanol (TCE) por cromatografíagaseosa 13 , realizándose modificaciones al método, las cualesse validaron utilizando los siguientes parámetros: precisión,linearidad, sensibilidad y límite de detección 14 , siguiendo loslineamientos del Internacional Conference Harmonization(ICH), para la validación de procedimientos analíticos 15 . Elanálisis se realizó a una temperatura del horno entre 90°C y180°C en rampa, según el esquema de la figura 1.187
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