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Chapitre 3 Partie pratique Figure III-14 : Chromatogramme CCM polyamide bidimensionnelle acétate d’éthyle Z. album Résultats et discussions : Les résultats sont ordonnés dans le tableau (III-4) qui contient le nombre et la couleur des taches de chaque extrait. Tableau III-4 : Regroupement des résultats du CCM polyamide bidimensionnel Extrait plante Nombre de taches Couleurs des taches Z. album 2 marron acétate d’éthyle bleu Z. cornutum 3 2 marrons bleu Marron Z. album 3 Jaune n-butanol bleu marron Z. cornutum 4 jaune bleu violet D’après les chromatogrammes 2D et les résultats de tableau (III-4) on note : Pour la phase acétate d’éthyle, l’espèce Z. album a montré deux taches une marron et l’autre bleue par-contre l’espèce Z. cornutum avait une tache de plus de couleur marron sombre. La chromatographie sur CCM polyamide de la phase n-butanol a révélé la présence de quatre taches (marron, jaune, bleu et violet) pour le genre Z. cornutum mais le genre Z. album a donné une tache jaune, une autre marron sombre et une bleue. 34 Dépôt de l’échantillon
Chapitre 3 Partie pratique III-5. Analyse quantitative des composés phénoliques : Cette analyse permet d’avoir une estimation sur la teneur en phénols totaux de l’échantillon .Le dosage des phénols totaux a été effectué par une méthode adaptée de Singleton et Rossi en utilisant le réactif de Folin-Siocalteu [26], tandis que les flavonoïdes ont été quantifiés par le dosage direct par le trichlorure d’aluminium d’après une méthode adaptée de Lamaiosn et Carnat [27]. III-5-1. Dosage des phénols totaux : Le dosage est réalisé selon la méthode citée avant, en utilisant le réactif de Folin. Le réactif est formé d’acide phosphomolybdique H3PMo12O4 et d’acide phosphotungstique H3PW12O40 qui est réduits par l’oxydation des phénols en oxydes bleus de tungstène W8O23 et de molybdène Mo8O3. Les phénols sont estimés par une spectroscopie UV dont l’acide gallique est utilisé comme un standard à une longueur d’onde λ =760 nm. HO III-5-1-1. Courbe d’étalonnage : COOH OH 35 OH Figure III-15 : structure de l’acide gallique Un standard de calibration a été préparé en utilisant des solutions d’acide gallique de différentes concentrations de 0.03 jusqu'à 0.3 g/l. On prend 100μl de la solution diluée, elle est ensuite oxydée par le réactif de Folin-Ciocalteu (dilué 10 fois) laissé 5 minutes et puis neutralisée avec 2 ml de carbonate de sodium 20% puis les solutions ont été secouées immédiatement et sont maintenues dans l’obscurité pendant 30 minutes à température ambiante. L’absorbance de chaque solution a été déterminée à 760 nm. La courbe d’étalonnage de l’acide gallique est représentée dans la Figure (III-16).
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