Page de garde - Université de Tlemcen

MATERIEL ET METHODES …………………………………………………… 47
I. Purification de l’ascorbate oxydase de Cucurbita pepo
medullosa…………………………………………………………………….
I.1. Préparation de l’extrait brut d’ascorbate oxydase……….. 48
I.2. Précipitation par le sulfate d’ammonium …………………. 49
I.3. Fractionnement par l’acétone…………………….………….. 50
II. Dosage des protéines de la préparation enzymatique…………. 52
II.1. Dosage des protéines par la méthode du biuret………… 52
II.1.1. Principe………………………………….……………….. 52
II.1.2. Préparation de la gamme d’étalonnage………… 53
II.1.3. Détermination de la concentration protéique…... 54
II.2. Dosage des protéines par absorptiométrie directe
dans l’ultraviolet……………………………………………………….
II.2.1. Principe du dosage……………………………………. 55
II.2.2. Mode opératoire………………………………………. 56
III. Dosage spectrophotométrique de l’acide ascorbique…...…... 59
IV. Détermination de l’activité enzymatique…………….…………… 61
IV.1. Détermination de la vitesse initiale d’oxydation………… 62
IV.2. Détermination de l’activité enzymatique volumique…... 62
IV.3. Détermination de l’activité enzymatique spécifique…… 63
V. Etude de l’influence du pH et de la température sur l’activité
de l’ascorbate oxydase…………………………………………………… 65
V.1. Influence du pH…………………………………………………. 65
V.2. Influence de la température…………………………………. 66
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