Etude de Pax 3 dans la différenciation des cellules souches - M2 ...

) Effet inhibiteur de Pax 3
i - Etude de la séquence promotrice de Dct :
Etant donné que Dct est co localisé avec Pax 3 et que Pax 3 est colocalisé avec Mitf
et Sox 10, les chercheurs ont déterminé la capacité de ces trois dernières protéines à activer
seule ou en combinaison, l’expression de Dct. Ils ont transfecté des cellules 293T (cellules
embryonnaires de rein humain) avec des constructions reportrices de l’activation du gène Dct
seule, soit avec Mitf et Sox 10, soit avec Mitf, Sox 10 et Pax3. Les constructions reportrices
diffèrent selon les délétions des boites conservées entre l’Homme et la souris, du promoteur
Dct (Figure 6).
Le taux de transcription est observé pour chaque délétion, grâce à la mesure de l’intensité
lumineuse due à la transcription du gène rapporteur de la luciférase. Ce gène est sous la
dépendance du promoteur Dct sauvage ou délété.
On observe que Sox 10 seul active le promoteur Dct ainsi que Mitf seul. Le taux
d’activation de ce promoteur est augmenté significativement lorsque Sox 10 et Mitf sont tous
les deux présents. Dans le cas où la boite 4 est délétée ainsi que dans le cas où les boites 4 et 3
sont délétées, les profils d’expression sont augmentés. Par contre, lorsque les boites 2, 3 et 4
sont délétées, on remarque qu’il n’y a plus d’activation du promoteur Dct. On en déduit donc
que la boite 2 de ce promoteur doit comporter le site de fixation des protéines activant sa
transcription.
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