Etude de Pax 3 dans la différenciation des cellules souches - M2 ...

De plus, les résultats montrent que lors de l’expression de Pax 3 dans les cellules il y
a une diminution du taux d’expression de la luciférase. Ceci démontre la capacité de Pax 3 à
inhiber l’activation du promoteur Dct par Mitf et Sox 10. De plus, il semblerait que le site de
liaison de Pax 3 sur Dct correspond au site de liaison de Mitf sur ce même promoteur.
ii - Séquence de la boîte 2 du promoteur Dct :
Une étude plus précise de la région enhancer (boite 2) du promoteur du gène Dct a
permis d’identifier les sites de liaison pour les protéines : Lef 1 (vert), Mitf (bleu) et Sox 10
(rouge) (Figure 7).
On remarque l’absence de site de fixation de Pax 3. Ce qui conforte notre hypothèse sur la
fixation de Pax 3 au niveau du même site que Mitf sur le promoteur Dct.
iii – Identification de la séquence de fixation de Pax 3 sur le promoteur Dct :
Dans le but de valider cette hypothèse, Lang et son équipe ont procédé à des réactions de
compétition entre les protéines Mitf et Pax 3. Ils ont mis en place des expériences
d’immunoprécipitation de chromatine (ChIP) sur des cellules 293T, étant transfectées par des
quantités différentes de plasmides d’expression Mitf et/ou Pax 3 (Figure 8). Après
immunoprécipitation des complexes ADN-protéine grâce à des anticorps anti-Pax 3 ou anti-
Mitf, la séquence correspondante à la boite 2 du promoteur Dct a été amplifiée par PCR.
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