Etude de Pax 3 dans la différenciation des cellules souches - M2 ...

c) Effet de la β caténine sur l’expression des gènes Myf 5 et Myo D
Si la présence de β caténine est vérifiée, une étude d’analyse du taux transcription
des gènes Myf 5 et Myo D sera réalisée. Comme Lang l’a réalisé pour démontrer le rôle de la
β caténine dans l’activation du promoteur Dct par Pax 3, des cellules 293T (cellules
embryonnaires de rein humain) seront transfectées par des constructions reportrices : un
plasmide où le gène Luciférase est sous le contrôle du promoteur Myf 5 (région de 145 pb
localisée entre -50 et -200 pb) ou un plasmide où le gène Luciférase est sous le contrôle du
promoteur Myo D (région enhancer de 258 pb). De plus, ces cellules seront transfectées par
des plasmides de type pGL2 (Promega) contenant les gènes Pax 3, Six 1, Six 4 et β caténine
sous le contrôle d’un promoteur fort tel que le CMV ; les protéines correspondantes étant
requises pour la transcription des gènes Myf 5 et Myo D.
Afin de tester l’effet de la β caténine sur l’activation des promoteurs d’intérêt,
différentes transfections seront réalisées. Tout d’abord, quatre contrôles seront effectués :
Contrôle 1 : aucune transfection des cellules 293 T.
Contrôle 2 : transfection avec le plasmide Pax 3 seul (cellules Pax 3 + ),
Contrôle 3 : transfection avec les plasmides Six 1 et Six 4 (cellules Six 1 + .Six 4 + ),
Contrôle 4 : transfection avec les plasmides Pax 3, Six 1 et Six 4
(cellules Pax 3 + .Six 1 + .Six 4 + ).
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