M - laboratoire PROTEE - Université du Sud - Toulon - Var

II- Matériels et méthodes :
II-1 Souches bactériennes
Dans le cadre de ce stage, 8 souches bactériennes ont été utilisées :
TC8 / TC9 / TC5 / FRA1 / FRA2 / FRA4 / FRN1 / TC10 (voir tableau 3 page 19)
TC pour Toulon Collection.
FRA pour Full Release Ancient.
FRN pour Full Release New.
II-2 Conservation des souches
La conservation de toutes les bactéries marines a été réalisée par cryogénisation. Pour cela
500 μl de suspension bactérienne en phase exponentielle de croissance en milieu VNSS
auxquels sont additionnés 500 μl de glycérol sont introduits dans des cryotubes et conservés à
-80°C.
II-3 Milieux de culture
Marine broth (MB) et marine broth agar (MA) :
Le MB (BD® : Becton, Dickson and company, Grenoble, France) (AnnexeI- I.2) est un
milieu liquide couramment utilisé pour la croissance des bactéries marines. Après sa
préparation, il est autoclavé et filtré sur du 0,2 μm. Le MA (BD® : Becton, Dickson and
company, Grenoble, France) se différencie du MB par sa concentration en MgCl2 et par
l’ajout d’agar à 1,5% (p/v). Il est coulé en surfusion dans des boîtes de Pétri. Ces milieux
permettent ici de faciliter la décongélation et la remise en culture.
Vaatanen Nine Salt Solution (VNSS) et VNSS agar :
Les cultures planctoniques des souches marines ont été caractérisées dans le milieu VNSS.
Pour 1 L de solution ce milieu comprend 1 g/L de peptone, 0,5 g/L de yeast extract, 0,5 g/L de
glucose, 0,5 g/L d’amidon soluble, 0,01 g/L de FeSO4.7H2O, et 0,01 g/L de Na2HPO4.
Ces composants sont dissous dans du NSS (Nine Salt Solution), constitué de 17,6 g/L de
NaCl, 1,47 g/L de NaSSO4, 0,08 g/L de NaHCO3, 0,25 g/L de KCl, 0,04 g/L de KBr, 1,87
g/L de MgCl2,6H2O, 0,41 g/L de CaCl2.2H2O, 0,01 g/L de SrCl2.6H2O, et de 0,01 g/L de
H3BO3. L’ensemble du milieu est homogénéisé puis autoclavé à 121°C pendant 15 minutes.
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