M - laboratoire PROTEE - Université du Sud - Toulon - Var

More documents

Recommendations

Info

Les spectres de masse de ce même composé sont en accord avec la présence de violacéine : deux ions pseudo-moléculaires à m/z 342 [M-H + ] - et m/z 344 [M+H + ] + sont en effet observés respectivement sur les spectres –MS et +MS. Il paraît donc maintenant fort probable que le composé responsable de la couleur violette de la souche FRA 4 est la violacéine. Cette souche a été identifiée comme étant Pseudoalteromonas ulvae (résultats antérieurs – tableau 3). Elle est décrite dans la littérature comme étant « darkpurple » et présentant des activités antifouling (Egan et al., 2001). Par ailleurs, des travaux de recherche d’activité de la violacéine isolée de bactéries du genre Chromobacterium ont montré que ce pigment possède également de nombreuses activités biologiques (pour exemples : antitumorale, antibactérienne, antivirale) (Durán et al., 2007). Dans l’optique de trouver un composé aux propriétés antifouling, mener des tests avec la violacéine isolée depuis notre souche Pseudoalteromonas ulvae (FRA4) semble être une piste intéressante. 30
IV- Conclusion et Perspectives Ce stage a permis la mise au point d’un protocole d’extraction des EPS de biofilms formés par différentes souches de bactéries marines. L’application de ce protocole à deux souches, TC9 et FRN1, cultivées en condition sessile en quantité importante a permis d’isoler des EPS selon leurs forces d’adhésion au biofilm. Le protocole doit donc se poursuivre, pour ces mêmes souches, par l’analyse des molécules présentes dans les échantillons obtenus à partir de SN1, SN2 et SN6, correspondant respectivement aux EPS solubles relargués dans le milieu, faiblement associés et fortement associés au biofilm. Il s’agira là de déterminer, grâce à des techniques de dosages colorimétriques spécifiques, le pourcentage en protéines et en polysaccharides ; la quantité de composés lipidiques étant déterminée, après l’étape de partage, en mesurant la masse de produits allant dans la phase organique (comparativement à la masse des phases aqueuse et interphase). Après élimination des protéines de chaque échantillon (phases aqueuses et interphases) grâce à un traitement enzymatique, les polysaccharides pourront être caractérisés (composition en monosaccharides, masse molaire). Enfin, dans le cas d’une purification possible, en termes de quantités disponibles, une analyse structurale par RMN et CPG-SM sera effectuée. Ce même travail de recherche est envisagé sur l’ensemble des souches sélectionnées. Tout composé purifié, de nature lipidique ou polysaccharidique sera testé pour son activité antifouling sur d’autres souches bactériennes. Parallèlement au travail réalisé sur les cultures importantes de deux souches, des cultures de l’ensemble des huit souches sélectionnées, sur 10 boîtes de Pétri, ont permis quant à elles d’avoir un aperçu de la teneur en EPS solubles ou faiblement liés produits par chacune des souches. Une attention particulière a été portée sur les profils lipidiques des EPS isolés. Une étude plus approfondie de tous les spectres RMN et IR-TF devra être faite, et un protocole d’analyse par CLHP sera appliqué dans le but d’obtenir une signature chimique de métabolites secondaires produits par les bactéries adhérées versus non adhérées. Cette analyse comparative qualitative et quantitative des métabolites secondaires produits pourrait permettre d’établir la fonction de ces composés produits en biofilm dans le recrutement ou au contraire dans la répulsion d’autres espèces bactériennes. Enfin, concernant le pigment produit par la souche FRA 4, Pseudoalteromonas ulvae, qui semble être la violacéine d’après les résultats obtenus par CLHP triple détection, une purification ainsi qu’une analyse structurale en RMN doivent être faites afin de confirmer notre hypothèse. S’il s’agit bien de la violacéine, et étant donné que la bactérie Pseudoalteromonas ulvae a été décrite pour son activité antifouling (Egan et al., 2000), une idée intéressante serait de tester la violacéine extraite de notre souche de Pseudoalteromonas ulvae, afin de voir si celle-ci aurait une activité antifouling tout en n’étant non toxique (activité antibactérienne notamment, à plus forte concentration). 31
Page 1 and 2: Université du Sud Toulon-Var Maste
Page 3 and 4: Sommaire I- Introduction ..........
Page 5 and 6: avoir des modes d’actions très d
Page 7 and 8: La recherche d’une alternative à
Page 9 and 10: Fig. 8a : Le SEA-NINE® extrait dep
Page 11 and 12: Fig. 10. Schéma de la matrice de s
Page 13 and 14: - Isolement des exopolysaccharides
Page 15 and 16: I-2 Introduction du sujet du stage
Page 17 and 18: II-4 Préculture / Culture en biofi
Page 19 and 20: II-9 Chromatographie liquide à hau
Page 21 and 22: Après cette courte durée d’imme
Page 23 and 24: Il s’agira par la suite de répé
Page 25 and 26: Souches Masse (mg) Masse (mg) SN1 S
Page 27 and 28: c) Spectres IR-TF Pour chacune des
Page 29: Sur le chromatogramme obtenu, à l
Page 33 and 34: ANNEXE 33

M - laboratoire PROTEE - Université du Sud - Toulon - Var

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?