partie 1 sélection première.qxp - sordalab

KIT ÉLECTROPHORÈSE DE L’ADN N°1
“ Digestion et carte de restriction ”
Précisez la
date de TP
OBJECTIFS PRATIQUES
Réalisation d’une digestion par une enzyme de restriction
Dépôts d’ADN dans les puits d’un gel d’agarose
Mise en route d’une électrophorèse et coloration du gel
OBJECTIFS THÉORIQUES
Approfondissement du principe de l’électrophorèse d’ADN
Interprétation de l’effet de la dilution et de la digestion sur l’ADN de saumon
Réalisation d’une carte de restriction à partir des bandes obtenues après électrophorèse
d’ADN de phage lambda digéré par 2 enzymes de restriction en s’aidant de la notice pour
établir les tailles des fragments en paires de bases
Couplage des résultats du TP avec des logiciels ou des sites Internet permettant d’analyser
les séquences d’un ADN connu (fichier du génome de phage lambda fourni au format .txt
sur le notre site Internet )
MANIPULATION PROPOSÉE
Réalisation d’une digestion d’un ADN de saumon par EcoRI (réalisée la veille du TP)
Electrophorèse sur gel d’agarose à 6 puits des ADN de saumon non dilué, dilué et digéré par
EcoRI (issu de l’étape précédente) ; des ADN de phage lambda digéré par EcoRI, digéré par
HindIII et double digéré par EcoRI et HindIII (les produits fournis sont digérés)
Interprétations des résultats en s’appuyant sur la notice pour trouver la taille des bandes
d’ADN obtenues
COMPOSITION DU KIT
Pour réaliser 4 gels de 20 ml de 6 puits chacun soit un total de 24 dépôts
d’ADN
Flacon pour réaliser l’agarose
100 ml de tampon TBE10x pH = 8,3 à diluer 10 fois pour obtenir 1000 ml de
tampon
1,6g d’agarose (pour 8 gels de 25 ml)
25 pasteurettes à gouttes calibrées pour dépôts dans les puits
0,25 ml de bleu de dépôt
0,05g d’ADN de saumon lyophilisé
50 μl d’enzyme de restriction EcoR1
100 μl d’une solution d’ADN du phage Lambda digéré par EcoR1
100 μl d’une solution d’ADN du phage Lambda digéré par HindIII
100 μl d’une solution d’ADN du phage Lambda digéré par EcoR1+HindIII
.16 g d’Azure A (coloration du gel)
10 ml d’eau stérile
Notice technique et pédagogique
PELLE À GEL POUR ÉLECTROPHORÈSE
Idéale pour la manipulation des gels d’électrophorèse durant les étapes de coloration, décoloration,
photographie et d’interprétation, cette pelle à gel en acrylique possède un bord
recourbé pour une préhension facilitée.
Les bords sont conçus pour éviter la chute du gel.
Dimensions : 8,5 x 9 cm avec 3 cm de zone de préhension.
Réf. ELECADN 46 € TTC
CONSERVATION 6 MOIS
Au congélateur : enzyme et ADN
Au réfrigérateur : colorant Azure A (à
l’abri de la lumière),
tampon TBE, eau stérile
MATÉRIEL NÉCESSAIRE
Cuve à électrophorèse d’ADN
(pour gel immergé)
Générateur 70-110 V, 20 mA
Bain marie ou four à micro-ondes,
Gants
DÉLAIS
Commander au moins 8 jours à l’avance
Préciser la date du TP sur le bon de commande.
Les produits sont proposés au détail en
page 383
Référence PELGEL
14,60 € TTC
RÉFRIGÉRANT PORTATIF POUR ENZYMES
C’est un substitut pratique au traditionnel bac de glace pilée.
Notre réfrigérant portatif possède un bac froid -15°C incorporé dans son fond.
Notre réfrigérant peut maintenir une température de 0°C pendant 8 heures.
Idéal pour préserver les enzymes et autres produits thermosensibles pendant les manipulations.
Capacité : 12 tubes à fond conique de 1,5 ml.
Référence DYNA
90 € TTC
REMPLACE LE
BAC À GLACE
228
Nos prix sont valables uniquement en France métropolitaine, Corse, DOM TOM (hors Réunion) et pour
les lycées Français à l’étranger. Pour les autres Pays, contacter notre revendeur - Coordonnées en page 455