partie 1 sélection première.qxp - sordalab

PLUSIEURS GÈNES SONT IMPLIQUÉS DANS L’ÉTABLISSEMENT DU PHÉNOTYPE
KIT MILIEU MINIMUM ET GÉNOTYPE
“ Un exemple de voie métabolique, chaîne de biosynthèse du tryptophane ”
COMPOSITION DU KIT
Le kit est automatiquement composé des souches et du milieu
SOUCHES :
Souche [G] : Saccharomyces cerevisae hist1 trp1
Cette souche est auxotrophe pour l’histidine et le tryptophane
Souche [H] : Ade4 trp4 exigeante en adénine et tryptophane.
Souche [I] : C’est la souche sauvage, elle n’a pas d’exigences particulières.
MILIEU :
- 1,2 litre de milieu minimum YNB, il sera automatiquement supplémenté
avec les tubes 23 et 25 pour donner le milieu “minimum” *
- 400 ml de milieu riche.
- 4 tubes : N° 23 10 ml d’adénine à 1mg/ml
N° 24 5 ml de tryptophane à 10mg/ml
N° 25 10 ml d’histidine à 10mg/ml
N° 26 5 ml d’acide anthranilique à 10mg/ml
4°C
CONSERVATION
DÉLAIS
Commander au moins 14 jours à l’avance.
Préciser la date exacte du TP sur le bon
de commande.
OPTIONS :
1) Matériel pour 40 élèves :
- 60 ensemenceurs stériles - 10 étaleurs stériles
- 10 compte-gouttes stériles calibrés
2) 100 Boîtes de pétri stériles
Notice technique et pédagogique
OBJECTIFS COGNITIFS
Acquérir les notions de voie de biosynthèse, auxotrophie-prototrophie, supplémentation du milieu de culture.
L’établissement d’un phénotype donné résulte de la synthèse de différentes protéines et implique par conséquent
plusieurs gènes.
MANIPULATION PROPOSÉE
Nous allons nous intéresser à la croissance ou l’absence de croissance de trois souches de levures (voir descriptifs
ci-dessous) sur différents milieux de culture afin de mettre en évidence l’existence d’une voie de biosynthèse du
tryptophane :
Ensemencement des trois souches sur :
- Milieu riche
- Milieu “minimum”*
- Milieu “minimum”* + Tryptophane
- Milieu “minimum”* + Acide anthranilique
* Nous ignorerons l’auxotrophie de la souche [G] pour l’histidine et celle de la souche [H] pour l’adénine. Les milieux minimums
seront automatiquement supplémentés avec ces deux composés, nous le noterons milieu “minimum”*.
RÉSULTATS OBTENUS
Sur milieu “minimum”*, les souches auxotrophes ne se développent pas contrairement au milieu riche. Les souches utilisées
ont besoin de tryptophane pour pousser sur milieu “minimum”*.
Les trois souches poussent sur milieu “minimum”* supplémenté de tryptophane.
L’acide anthranilique est un intermédiaire de la chaîne de biosynthèse du tryptophane situé en aval de la mutation trp1 et
en amont de la mutation trp4. Sur milieu “minimum”* supplémenté d’acide anthranilique, les souches G (mutées sur le gène
trp1) et I poussent alors que la H (mutée sur le gène trp4) ne se développe pas.
DÉSIGNATION RÉFÉRENCE PRIX TTC
Souches et milieux en poudre MMG/SMP 46,15 €
Souches et milieux à couler MMG/SMAC 52,45 €
Petit Matériel MMG/MAT 8,75 €
100 boîtes de pétri stériles (diam 90) MMG/BP 12,90 €
Souche de levures G, H ou I sur boîte Préciser 9,15 €
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