EIA alternativo EIA + *Dudoso - + 18 2 1 BINDAZYME Dudoso 3 3 3 <strong>Anti</strong>-β 2 GP1 IgA S EIA - 1^ 5 78 Sensibilidad relativa 94,7% Especificidad relativa 98,7% Correlación relativa 98,0% *Las muestras en el rango dudoso se excluyeron del análisis. ^La muestra discrepante fue negativa en el kit alternativo. 9.4 SENSIBILIDAD ANALÍTICA Se ensayaron múltiples replicados de cada muestra y se estudiaron mediante el análisis estadístico t-Student. Dicho estudio confirmó que el ensayo antiβ 2 GP1 IgA S puede diferenciar entre dos muestras con valores cercanos al valor inferior del rango de medida (173% y 199% del calibrador inferior). 9.5 RANGO DE MEDIDA El rango de medida del ensayo es de 3,7 – 300 U/mL. 9.6 SUSTANCIAS INTERFERENTES Se añadieron distintas sustancias interferentes a muestras anti-β 2 GP1 IgA positivas y negativas, que fueron posteriormente analizadas. El método utilizado para comprobar el efecto de dichas sustancias fue el kit Interference Check A plus TM de Kokusai, Shiyaku, Japón. Sustancia Bilirrubina L (libre) Bilirrubina C (conjugada) Hemoglobina hemolizada Quilo Factor reumatoide Concentración 18.0mg/dL 19,3mg/dL 482mg/dL 1430 Unidades FT 50,0 UI/mL No se observaron interferencias en las muestras ensayadas. 10 VALORES ESPERADOS Se determinó el cut-off positivo en base al ensayo de muestras normales (100 hombres y 100 mujeres) para el ensayo anti-β 2 GP1 IgA S, siendo el resultado de 20,0U/mL, con una zona dudosa de 15,0 – 20,0U/mL. Los rangos indicados son únicamente orientativos. Los ensayos ELISA son muy sensibles y capaces de detectar pequeñas diferencias en grupos de población. 11 REFERENCIAS <strong>Anti</strong>-β 2 GP1 IgA < 15,0 U/mL Resultado negativo 15,0-20,0 U/mL Dudoso >20,0 U/mL Resultado positivo 1. Miyakis S, Lockshin MD, Atsumi T, Branch DW, Brey RL, et al. (2006). International concensus statement on an update of the classification criteria for definite antiphospholipid syndrome. J Thromb Haemost; 4: 295-306. 2. Galli M, Comfurius P, Maassen C, Hemker HC, de Baets MH, et al. (1990). <strong>Anti</strong>cardiolipin antibodies (ACA) directed not to cardiolipin but to a plasma protein cofactor. Lancet; 335: 1544-7. 3. McNeil HP, Simpson RJ, Chesterman CN & Krilis SA. (1990). <strong>Anti</strong>-phospholipid antibodies are directed against a complex antigen that includes a lipid-binding inhibitor of coagulation: beta 2-glycoprotein I (apolipoprotein H). Proc Natl Acad Sci USA; 87:4120-4124 4. Schousboe I. (1985). β 2 -Glycoprotein I: A plasma inhibitor of the contact activation of the intrinsic blood coagulation pathway. Blood; 66: 1086-1091. 5. Nimpf J, Bevers EM, Bomans PH, Till U, Wurm H, et al. (1986). Prothrombinase activity of human platelets is inhibited by β 2 -glycoprotein-I. Biochim. Biophys. Acta; 884: 142-149 6. Nimpf J, Wurm H & Kostner GM. (1987). β 2 -Glycoprotein-I (apo-H) inhibits the release reaction of human platelets during ADP-induced aggregation. Atherosclerosis; 63: 109-114. 7. Matsuura E, Igarashi Y Yasuda T, et al. (1994). <strong>Anti</strong>cardiolipin antibodies recognize beta 2-glycoprotein I structure altered by binding with an oxygenated modified solid phase surface. J Exp Med; 179:457-462 8. Matsuura E, & Koike T. (1996) in: Autoantibodies, pp 109-114, Peter JB & Shoenfeld Y (eds), Elsevier Science, Amsterdam. 9. Protein Reference Unit Handbook of Autoimmunity (3rd Edition) 2004 Ed A Milford Ward. J. Sheldon, GD Wild. Publ. PRU Publications, Sheffield. 14 12 PLANTILLA DE PLACA Vea la parte posterior de la hoja de instrucciones. Resumen del procedimiento 1. Añada 100µL de cada calibrador, control y muestra diluida 1:100 en los pocillos correspondientes. Incube durante 30 minutos. Lave. 2. Añada100µL de conjugado a cada pocillo. Incube durante 30 minutos. Lave. 3. Añada 100µL de sustrato a cada pocillo. Incube durante 30 minutos. 4. Añada 100µL de solución de parada a cada pocillo. Mida la absorbancia a 450 nm. BINDAZYME es una marca de The Binding Site Ltd. P.O. Box 11712, Birmingham B14 4ZB. England Insert Code: E141, Version: 17 January 2008, Page 12 of 13
Plate Template Plattenschema Plan de plaque Plantilla de placa A 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 B C D E F + G H Insert Code: E141, Version: 17 January 2008, Page 13 of 13
Change language