Cinétique pré-stationnaire et réactions rapides - IBMC

spectrofluorimètre classique impose une variation de signal relativement importante. D’autre
part, la cellule de mesure est reliée à la chambre de mélange par des tuyaux relativement
longs, de manière à pouvoir l’insérer dans le spectromètre, ce qui occasionne des volumes
morts (perte de réactifs) et donc des temps morts relativement importants. Enfin, comme dans
tous les systèmes utilisant un seul moteur (ou système pneumatique) pour injecter les réactifs,
le rapport des volumes des différents réactifs ne peut être modifié qu’en utilisant des
seringues de volumes différents. Typiquement, ces accessoires de stopped flow ont un temps
mort minimum de 8 à 10 ms. Le volume d’amorçage de chaque réactif est de 260 l à 1 ml et
100 à 200 l de chaque réactif sont consommés à chaque mélange.
Plusieurs appareils commerciaux dédiés au stopped flow sont également disponibles :
les principaux fournisseurs sont Applied Photophysics, BioLogic et HighTec. Un exemple
d’instrument est présenté dans la figure 12.
Figure 12 : Deux vues du SX20 d’Applied Photophysics. L’appareil présenté est pourvu d’une
option permettant un mélange séquentiel (voir plus loin) et d’un système de détection de
l’absorbance.
Cette figure permet de distinguer les composants principaux de ce type d’instruments.
On distingue, de droite à gauche, l’alimentation de la lampe au xénon, la lampe (module noir),
un monochromateur, le module de mélange proprement dit à l’arrière duquel on aperçoit le
photomultiplicateur (sur la vue de droite), le module de gestion électronique (sous l’écran
dans la vue de gauche) et le microordinateur. Avec une cellule optique de 20 l dont les
trajets optiques sont de 2 et 10 mm (au choix), le temps mort est de 1,1 ms et le volume de
chacun des réactifs est de 40 l par injection. Une cellule de 5 l avec des trajets optiques de
1 et 5 mm permet de réduire le temps mort à 0,5 ms.
Comment mesurer précisément de faibles variations de signal ?
Dans les expériences de stopped-flow, ainsi que dans plusieurs techniques décrites plus
loin, les réactions étudiées s’accompagnent parfois de très faibles variations de signal (moins
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