Avaliação da reconstituição imunológica em pacientes com diabete ...

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• PCR - do inglês "polymerase chain reaction" ou reação de polimerização em cadeia• Pré-cond - pré-condicionamento• Pré-mob - pré-mobilização• q.s.p - quantidade suficiente para• TCR - inglês “T cell receptor”, ou receptor de célula T• RNA - do inglês “ribonucleic acid” ou ácido ribonucléico• RNAm - ácido ribonucléico mensageiro• RPMI - meio Roswell Park Memorial Institute• SBF - soro bovino fetal• TA - temperatura ambiente• TACTH - Transplante autólogo de células tronco hematopoéticas• TCTH - Transplante de células tronco hematopoéticas• T H - T "helper” - células T auxiliadoras• TNF-α - do inglês “tumor necrosis factor alpha” ou fator de necrose tumoral alfa• Treg - célula T reguladora• Tris - Tris-hidroximetil aminometano básico• Tx - transplante• Vα - região variável da cadeia alfa do receptor de célula T• Vβ - região variável da cadeia beta do receptor de célula T
SUMÁRIO1 Introdução ..................................................................................................................................... 11.1 Auto-imunidade e doenças auto-imunes.................................................................................. 21.2 Diabete melito do tipo 1 ........................................................................................................... 91.3 Esclerose múltipla.................................................................................................................. 131.4 Transplante de células tronco hematopoéticas em doenças auto-imunes ............................. 171.5 Mecanismos de ação do TCTH autólogo em doenças auto-imunes ...................................... 231.6 Repertório do receptor de células T em doenças auto-imunes .............................................. 282 Objetivos ..................................................................................................................................... 312.1 Objetivo geral......................................................................................................................... 322.2 Objetivos específicos ............................................................................................................. 323 Casuística, Material e Métodos.................................................................................................... 333.1 Delineamento do estudo ........................................................................................................ 343.2 Casuística .............................................................................................................................. 343.3 Controles saudáveis .............................................................................................................. 373.4 Isolamento das células mononucleares do sangue periférico ................................................ 373.5 Imunofenotipagem das subpopulações celulares do sangue periférico ................................. 393.6 Detecção de citocinas intracelulares em linfócitos T ativados................................................ 413.7 Extração de RNA pelo método de Trizol ................................................................................ 433.7.1 Eletroforese de amostras de RNA em gel de agarose sob condições desnaturantes.... 443.8 Transcrição reversa ............................................................................................................... 453.8.1 Validação da transcrição ............................................................................................... 453.9 Método de TCRBV CDR3 Spectratyping................................................................................ 463.9.1 Reação de PCR (Vβ-Cβ) para determinação das famílias Vβ do Receptor de Células(TCR) ...................................................................................................................................... 463.9.2 Reação de elongação Vβ-Cβ (Run-off).......................................................................... 473.9.3 Preparo do gel de seqüenciamento............................................................................... 473.9.4 Preparo das amostras e aplicação no gel de seqüenciamento...................................... 48
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LISTA DE PUBLICAÇÕESVoltarelli JC
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