DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇÃO DE METODOLOGIA PARA QUANTIFICAÇÃO DE QUININA EM EXTRATO DE QUINA VERMELHA (Cinchona officinalis L.) PELO MÉTODO DE CLAE

More documents

Recommendations

Info

1. INTRODUÇÃO Tradicionalmente utilizadas nos Andes para o tratamento de febres, cascas de algumas espécies de plantas chamadas popularmente por Quina são conhecidas há séculos por possuírem propriedades terapêuticas. Quando introduzidas na Europa por missionários, em meados do século 17, foram vastamente utilizadas como tratamento antimalárico. As Quinas são compostas por diferentes espécies de plantas, sendo os principais gêneros Cinchona ou Remijia (3, 9, 23, 25, 26). Muitos compostos já foram identificados nos cascos das Quinas mais estudadas, como compostos fenólicos, ácidos orgânicos e saponosídeos. Entre estes, destaca-se o grupo dos compostos alcaloides quinolínicos, principalmente quinina, quinidina, cinchonina e cinchonidina (12, 14,). As cascas secas da árvore Cinchona contêm aproximadamente de 4 a 12% de alcaloides, principalmente diastereoisômeros quinina/quinidina e cinchonina/cinchonidina. A Quinina é o composto majoritário e equivale a aproximadamente 80% do total de alcaloides presentes nas cascas. É um potente veneno protoplasmático que atua praticamente em qualquer célula. Entretanto, é utilizada na medicina como antimalárico e também para o alívio de câimbras musculares noturnas. Pode ser encontrada em alguns refrigerantes, como por exemplo, água tônica, que pode conter mais de 80 µg/mL, o que é responsável pelo sabor amargo (6, 11, 17, 20). A maior parte da quinidina absorvida é metabolizada pelo fígado, no entanto, 13% a 27% é excretado na forma intacta pelos rins. Muitos metabólitos da quinidina já foram identificados, tais como 3-hidroxiquinidina, 2-oxoquinidinona, quinidina-N-oxido, quinidina- 10,11-dihidrodiol e O-desmetilquinidina, que quando estudados isoladamente ou em combinação com a quinidina apresentaram atividade antiarrítmica (15, 16, 18). Em termos toxicológicos, o consumo da quinina deve ser evitado por mulheres grávidas, indivíduos com quadro de insuficiência hepática e, principalmente, crianças. Com o consumo de quinina em doses excessivas, pode-se observar intoxicação e um quadro reversível chamado cinchonismo (4, 24). O cinchonismo é uma síndrome causada por envenenamento agudo e é comumente observada após tentativas de abortos, suicídios ou envenenamento acidental em crianças. A perda da visão é um dos mais importantes efeitos colaterais reportados na literatura, mas o local onde ocorre o efeito tóxico na retina e a gestão para o seu tratamento continua sendo discutido (1). Tendo em vista todos os riscos e aspectos toxicológicos da quinina, o estudo tem como objetivo o desenvolvimento e validação de uma metodologia para a quantificação de quinina em extratos hidroalcoólicos de Quina vermelha (Cinchona officinalis).
2. MATERIAIS E MÉTODOS 2.1. Reagentes Utilizou-se acetonitrilo com pureza superior a 99,98% (J.T.Baker®), água ultrapura (sistema de purificação Synergy®), fosfato de potássio com pureza superior a 99,9% ( Merck®) e ácido fosfórico, com teor superior a 85% (Quemis®). Como padrões de referência, foram utilizadas quinina 98,6% (Sigma-aldrich®) e quinidina a 91,3% (Sigma-aldrich®). 2.2. Instrumentação O sistema integrado de cromatografia líquida de alta eficiência Merck Hitachi Chromaster® é composto por um detector DAD 5430 VWR®, um injetor automático VWR® Hitachi 5210 Chromaster, um forno VWR® Hitachi 5310 Chromaster e uma bomba quaternária VWR® Hitachi Chromaster 5110. As fases móveis foram desgaseificadas no degasser Branson 3510 e o ajuste do pH foi efetuado com pHmetro Mettler Toledo MP 220 (7,8, 27). 2.3. Preparo das amostras Para o preparo das amostras de extrato hidroalcoólico de Cinchona officinalis pesou-se 1 g do extrato em balão volumétrico de 5 mL e completou-se o volume com acetonitrilo, obtendo-se uma solução de proporção 1:5, de extrato e acetonitrilo, respectivamente. Após a amostra diluída, filtrou-se em filtro CHROMAFIL® Xtra, PET – 20/25 0,20 µm diretamente dentro de um vial e, posteriormente, injetou-se no equipamento (17,21). 2.4. Preparo dos padrões Para o preparo dos padrões, inicialmente pesou-se 10 mg do padrão de quinina em balão volumétrico de 100 mL. Em seguida, adicionou-se aproximadamente 2 mL de acetonitrilo e levou-se ao ultrassom por 10 minutos. Após dissolvido, completou-se o volume do balão com acetonitrilo, obtendo uma solução estoque de 1mg/mL. A partir desta solução foi preparada uma solução mãe de 100 µg/mL e, a partir dessa, foram feitas diluições nas concentrações de 5, 10, 20, 30 e 50 µg/mL para a construção da curva de calibração. 2.5. Condições cromatográficas Utilizou-se uma Coluna Superspher®, RP-18, (4,6 x 150 mm, 5 mm; Agilent TM ); fase móvel composta por tampão fosfato monopotássico 0,05M em água pH = 3,0 e acetonitrila com fluxo de 1 mL/min com detector DAD (arranjo de fotodiodos) ajustado em comprimento de onda ʎ = 254 nm (split bandwidth = 4 nm; DAD off = 32 minutos). O volume de injeção foi de 5 µL (17, 7, 8).
Page 1: DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇÃO DE ME
Page 5 and 6: As injeções foram realizadas em t
Page 7 and 8: 3.3. Validação analítica A valid
Page 9 and 10: 3.3.4. Limites de quantificação (
Page 11: Washington, DC: Conservation Intern

DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇÃO DE METODOLOGIA PARA QUANTIFICAÇÃO DE QUININA EM EXTRATO DE QUINA VERMELHA (Cinchona officinalis L.) PELO MÉTODO DE CLAE

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?