Revista Analytica Edição 112

Artigo 1
As colunas usadas em HPLC são empacotadas
com microesferas de sílica e a fase estacionaria
liquida é impregnada e presa no interior e
na superfície dessas microesferas. Essas partículas
têm muitos poros por onde a fase móvel
arrasta a substância para o interior da partícula
e onde o processo de partição ocorre.
Quanto maior a área superficial dessas partículas,
maior será a partição nessa coluna. A figura 2
ilustra uma coluna empacotada de LC onde dois
compostos A e o B são separados por partição nas
microesferas empacotadas dessa coluna.
Figura 2: Coluna micro empacotada usada em HPLC
Figura 3: Partículas usadas no empacotamento das colunas de HPLC modernas com núcleo totalmente poroso
e núcleo sólido.
Essas micro esferas podem ser observadas na
figura 3 com a partícula totalmente porosa
com 1,8 um de tamanho e a partícula com
núcleo solido e partículas superficiais.
Em SFC as colunas podem ser as capilares de
sílica fundida usadas em GC e as empacotadas
usadas em HPLC, ou seja, não tem colunas especificas
de SFC porque elas se situam entre as
duas cromatografias GC e HPLC.
A fase móvel usada para transportar a molécula
pela coluna é o que define o tipo de cromatografia,
e pode ser GC, HPLC ou SFC.
GC usa sempre um gás como fase móvel e
esse gás geralmente é o hidrogênio, nitrogênio
ou hélio. Nesse caso a fase móvel
não interfere na separação e deve somente
transportar as moléculas que estão em fase
gasosa. As aplicações em GC dependem da
capacidade da molécula sobreviver e não
degradar por temperatura.
HPLC usa sempre um líquido como fase móvel. Para
um composto poder ser analisado por HPLC ele precisa
primeiramente ser solúvel na fase móvel.
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Revista Analytica | Maio 2021
Os líquidos ou fases moveis mais usados em
HPLC são água, metanol, acetonitrila, isopropanol
e hexano. Geralmente à esses líquidos
são adicionados uma pequena quantidade
de modificadores que podem mudar o pH ou
a eficiência dessa fase móvel para solubilizar
melhor os analitos de interesse.