Susanna Tamman

PCR viidi läbi lõppmahus 25 µl, mis sisaldas 2 µl restriktsiooniprodukti ja järgmisireagente vastavates kontsentratsioonides: 0,2 mM dNTP (igat nukleotiidi)(Ferments, Leedu),0,5 ühikut Taq polümeraasi (Fermentas, Leedu), 1,5 mM MgCl2 (Fermentas, Leedu) ja 10pmol kõiki praimereid. Reaktsiooni läbiviimiseks kasutati termotsüklerit Eppendorf MasterGradient. Praimerid ja termotükleri programm on toodud tabelites 3 ja 4. (van der Zee, 2002)Tabel 3. Töös kasutatud restrikaasid, neile vastavad adapterid ja praimeridRestriktaas Lõikesait Adapter PraimerXbaI5’T↓CTAGA5’CTAGTACTGGCAGACTCT5’AGAGTCTGCCAGTACTAGAAGATC↓T3’ATGACCG5’AGAGTCTGCCAGTACTAGNheI5’G↓CTAGC5’AGAGTCTGCCAGTACTAGCCGATC↓G5’AGAGTCTGCCAGTACTAGCGPstI5’CTGCA↓G5’CTCGTAGACTGCGTACATGCA5’GACTGCGTACATGCAGGG↓ACGTC3’CATCTGACGCATGT5’GACTGCGTACATGCAGAG5’GACTGCGTACATGCAGATEcoRI5’G↓AATTC5’AATTGGTACGCAGTCTAC5’GTAGACTGCGTACCAATTCCTTAA↓G3’CCATGCGTCAGATGCTCTabel 4. Töös kasutatud termotsükleriprogramm1. T=95 °C 00:01:002. T=94 °C 00:01:003. T=65 °C 00:01:004. T=72 °C 00:02:305. Go to 2 Rep. 396. T=72 °C 00:07:007. HOLD 4 °C21